HPLC-电化学检测器测定单胺类神经递质的研究

摘要

单胺类神经递质是哺乳动物中枢神经系统中调节神经生理功能的重要物质,包括肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺等.由于此类物质和很多疾病密切相关,研究单胺类神经递质及其代谢产物在生物体内浓度的变化对疾病的诊断治疗具有重要意义. 本文采用高效液相色谱一库仑阵列电化学检测器(HPLC-ECD)对小鼠脑组织中的单胺类神经递质及其代谢产物的检测方法进行了系统研究.通过对样品的前处理方法的改进,对检测电极电势的选择和流动相条件的优化,确定了小鼠脑组织中九种神经递质及其代谢产物的含量的检测条件. 将健康小鼠拉颈处死,立刻迅速的分离出脑组织,用预冷的生理盐水洗净,用滤纸吸干水分,-80℃保存.分析时取出,称重,放入玻璃匀浆器中,加预冷的0.1mol/L高氯酸溶液匀浆,10000×g低温(4℃)离心10min两次,收集上清液,用0.22μm微孔滤膜过滤,然后用液相色谱.电化学检测器检测.液相色谱的流动相组分A为50mmol/L乙酸钠水溶液(用乙酸调至pH 5.0),组分B为甲醇,采用的梯度为:0-15min,B的体积浓度由4﹪上升至15﹪；15-23min,B的体积浓度保持在15﹪；流速为1.0mL/min.四组电极的检测电势分别为0mV、200mV、500mV和700mV.在此条件下,小鼠脑组织中的九种单胺类神经递质及其代谢产物的回收率都在90﹪以上；检测限为2-8ng/mL. 本文对所建立的方法均进行了周密的验证,结果显示此方法准确、灵敏,操作简单,方便快捷,适宜生物样品的检测.

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前言

第一章文献综述

1.1神经递质概述

1.1.1神经递质的定义

1.1.2神经递质的分类

1.1.3生物样品种类与样品预处理

1.1.4分析方法的评价

1.2生物样品中单胺类神经递质的检测

1.2.1单胺类神经递质

1.2.2单胺类神经递质的检测

1.3液相色谱法

1.3.1液相色谱检测器分类

1.3.2液相色谱—电化学检测器

1.3.3 ESA库仑阵列电化学检测器简介

1.4本文研究的主要内容

第二章色谱条件的建立

2.1仪器设备与材料

2.1.1仪器设备

2.1.2材料与试剂

2.2色谱条件的初步建立与优化

2.2.1初始色谱条件的建立

2.2.2色谱条件的优化

2.2.3方法确证

2.3结果与讨论

2.3.1色谱条件的选择

2.3.2方法确证讨论

2.3.3与其他方法的比较

第三章小鼠脑组织样品中单胺类神经递质的测定

3.1仪器设备与材料

3.1.1仪器设备

3.1.2材料与试剂

3.1.3实验动物

3.2实验方法

3.2.1小鼠脑组织样品的处理

3.2.2检测方法确证性

3.3结果与讨论

3.3.1小鼠脑组织样品处理方法的优化

3.3.2检测方法确证性

3.3.3与其它方法的对比

3.3.4脑组织样品的测定

3.3.5电极维护

第四章结论与展望

4.1结论

4.2展望

参考文献

发表论文情况

致 谢