Cyanothece 51142染色体复制起始区的预测及验证

摘要

Cyanothece 51142是一种具有固氮作用的海洋蓝细菌,在白天存在日光时进行光合作用,而在晚上进行固氮作用。2008年,Welsh等报道了它的全基因组序列,但是进行基因注释时,用传统的GC skew以及DnaA box分析方法不能确定它的复制起始区,而未能标注出复制起始区的基因序列。Feng Gao教授利用在线ori C预测软件Ori-Finder对其环形和线性染色体的复制起始区进行了预测,本课题对Feng Gao教授用Ori-Finder预测的Cyanothece 51142的染色体复制起始区的结果进行了验证,并得到了预期的实验结果。
　　首先,利用DNA重组技术得到包含环状及线状染色体ori C的克隆载体pEASY-T1-ori C及pEASY-T1-ori L,表达DnaA蛋白的表达载体pGEX-4T-1-DnaA,表达DnaA(IV)蛋白的表达载体pET28a-DnaA(IV),转化进入大肠杆菌DH5α、BL21及BL21(DE3)感受态细胞中构建了基因工程菌DH5α(pEASY-T1-ori C/pEASY-T1-ori L),BL21(pGEX-4T-1-DnaA)及BL21(DE3)(pET28a-DnaA(IV))。
　　其次,对BL21(pGEX-4T-1-DnaA)及BL21(DE3)(pET28a-DnaA(IV))的诱导条件经过一系列优化后确定了诱导表达条件,经过GST-tag及His-tag亲和层析纯化得到了DnaA(IV)蛋白并用于后续结合实验的验证。
　　最后,进行DnaA(IV)蛋白与Cyanothece 51142环状及线状染色体的ori C区的EMSA结合实验验证,验证显示实验结果与预期结果相符,证明DnaA(IV)蛋白能够与预测的ori C区呈现浓度依赖型结合,为ori C区的软件预测结果提供了实验佐证,实验结果显示软件预测结果的ori C区正确。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

第一章 文献综述

1.1原核生物染色体DNA复制

1.2原核生物染色体DNA复制起始区及复制起始蛋白

1.3原核生物染色体复制起始区预测及验证

1.4本研究的具体内容及研究路线

第二章 克隆及表达载体的构建

2.1实验材料

2.2载体构建方法

2.3实验结果

2.4本章小结

第三章 复制起始蛋白GST-DnaA与DnaA(IV)的表达与纯化

3.1实验材料

3.2实验方法

3.3实验结果

3.4本章小结

第四章 复制起始蛋白与复制起始区结合性实验

4.1实验材料

4.2实验方法

4.3实验结果

4.4本章小结

第五章 结论与展望

5.1结论

5.2展望

参考文献

发表论文和参加科研情况

致谢