牛泡沫病毒中国株env基因在大肠杆菌中的表达

摘要

该文以牛泡沫病毒中国株BFV3026为材料,分别构建了全长以及缺失了信号肽或跨膜区的SU和TM蛋白的表达质粒.并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达.SDS-PAGE显示:无论是完整的还是信号肽缺失的SU蛋白以及缺失跨膜区的TM蛋白均可获得有效表达,其表达量分别占菌体总蛋白的10.3﹪、13.7﹪和20.8﹪.免疫印迹证实它们具有抗原性.并利用金属螯合层析法对所表达的蛋白进行了初步地纯化.而带有由连续疏水性氨基酸组成的跨膜区的TM蛋白未能在BL21(DE3)菌株中获得有效的表达,该文就导致其不表达的原因进行了初步的探讨,确定表达蛋白的跨膜区可能是使表达受阻的主要原因.

目录

摘要

ABSTRACT

前言

1泡沫病毒简介

1.1病毒颗粒的超微结构

1.2病毒基因组的结构

1.3泡沫病毒的基因表达调控

1.4泡沫病毒的复制

2泡沫病毒的结构蛋白

2.1 Gag

2.2 Pol

2.2 Env

3利用原核体系表达目的基因

3.1原核表达系统

3.2真核基因在大肠杆菌中的表达

4前期工作的基础

5本研究的意义

材料与方法

1实验材料

1.1病毒、细胞和实验动物

1.2菌株

1.3质粒

1.4探针

1.5计算机软件

1.6主要试剂

2实验方法

2.1序列分析

2.2聚合酶链式反应

2.3质粒构建

2.4重组蛋白的诱导表达

2.5蛋白质的纯化

2.6抗血清的制备

2.7免疫印迹实验

2.8探针的制备

2.9斑点杂交

结果

1 Env蛋白的结构预测

2目的基因的扩增及表达质粒的构建

2.1目的基因的扩增

2.2目的基因的克隆

3目的蛋白的诱导表达

3.1 SU系列蛋白的诱导表达

3.2 TM系列蛋白的诱导表达

4表达蛋白的免疫学检测

5表达蛋白的纯化及免疫学检测

5.1纯化条件的选择

5.2纯化结果

5.3免疫学检测

讨论

1泡沫病毒Env蛋白有着广阔的应用前景

2研究泡沫病毒Env蛋白对研究其它病毒Env蛋白有借鉴意义

3目的基因在大肠杆菌中的有效表达受控于多种因素

3.1目的基因的本底表达抑制菌体生长

3.2表达菌株的选择因目的蛋白而异

3.3穿膜蛋白TM的跨膜区影响其表达

3.4 Env蛋白跨膜区中的某些特殊氨基酸对表达有抑制作用

4不同的目的蛋白应选择不同的纯化方法

小结

参考文献

附录

致谢