用PCR-SSP方法对中国恒河猴MHC-I分子分型的初步研究

摘要

该文采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)及RT-PCR的方法,在101例中国恒河猴样本中,对报道的印度恒河猴中存在的8个Mamu-A位点等位基因(Mamu-A*01,Mamu-A*02,Mamu-A*04,Mamu-A*08,Mamu-A*11,Mamu-A*13 Mamu-NA4,Mamu-NA7)和6个Mamu-B位点等位基因(Mamu-B*01,Mamu-B*07,Mamu-B*12,Mamu-NB2,Mamu-NB4,Mamu-NB5)进行了基因型的初步分析.结果显示Mamu-A*02和Mamu-NA7在所检测的中国恒河猴样本中有极高的阳性率(>70﹪);而Mamu-A*11,Mamu-NA4,Mamu-B*12和Mamu-NB4,有低的阳性率(<1﹪),且各等位基因出现的频率存在地区间差异.对Mamu-A*01,Mamu-A*08,Mamu-NA7,Mamu-B01,Mamu-NB2的测序分析显示出与已发表的印度恒河猴基因序列85﹪-100﹪的相似性.根据分型研究的结果选择9只中国恒河猴,使用包含特定抗原决定簇的重组蛋白疫苗进行免疫.以酶联免疫斑点(ELISPOT)的方法检测动物产生的抗原特异性T淋巴细胞反应.结果显示,对已知由Mamu-A*01提呈的抗原表位YAPP和P11c,被检测的中国恒河猴中没有强烈反应,但不同动物个体间抗原特异性的T细胞反应确实存在着差异.上述结果提示,中国恒河猴Mhc-I类基因可能存在与已知印度恒河猴不同的特征,需要对其分型和功能进行进一步的研究,以完善中国恒河猴作为细胞免疫和AIDS疫苗测试动物模型的建立.

目录

文摘

英文文摘

第一部分前言

一.HIV/AIDS的发展形势及疫苗的研究状况

二.细胞免疫在控制HIV/AIDS中的作用

三.针对HIV/AIDS建立的有关激发细胞免疫疫苗的研究

四.疫苗研究中动物模型的建立与MHC分型研究

五.本文的工作内容

第二部分材料与方法

一.材料与试剂

二.方法

第三部分结果与讨论

Ⅰ.结果

一.用PCR-SSP对中国恒河猴Mamu-I分子分型

二.对已知序列的Mamu-I等位基因在中国恒河猴中存在及分布情况的分析

三.对等位基因特异性扩增产物的测序分析

四.测序结果的比较分析

五.Mhc-I类基因cDNA的克隆及序列分析

六.免疫测试结果

Ⅱ.讨论

一.中国恒河猴中Mhc-I类分子分型的方法学

二.对中国恒河猴样本中Mamu-I等位基因的分析

三.待解决的问题

四结论

参考文献

致谢

名词缩写

附录1PCR结果电泳图片

附录2测序结果比较