猪传染性胃肠炎（TGE）病毒在组织细胞上增殖及其抗体的鉴定研究

摘要

猪传染性胃肠炎(TGE)是由冠状病毒引起的高度接触传染性、季节性发病的一种肠道疾病，两周龄以下仔猪感染死亡率高达100％，给养猪业及相关产业带来巨大损失。在分类上猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)属冠状病毒科、冠状病毒属、第一群。它与同群的猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、犬冠状病毒(CCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)以及猫肠道冠状病毒(FECV)存在抗原相关性，PRCV在血清学上与TGEV存在交叉反应，容易引起误诊。本研究从病毒组织培养和抗体鉴别诊断两个方面进行了探讨，筛选出TGE病毒在组织细胞上培养的最适条件和特异性的鉴别诊断方法。猪传染性胃肠炎在国际动物贸易中是占据着重要地位，我国与国外签订的进出口猪检疫议定书中都要求对该病进行检测。因此开展这方面研究具有重要实际意义和广阔的应用前景。 其一、猪传染性胃肠炎(TGE)病毒在组织细胞上增殖对猪睾丸细胞(ST)、猪肾细胞(pk15)培养液不同配方进行比较研究发现，用含15％FBS的生长液进行细胞传代，含30％FBS生长液制备细胞悬液对细胞吸附、细胞单层形成以及TGEV细胞病变(CPE)判定都起到良好效果。当用15％胎牛血清(FBS)生长液传6-7代后，可以用15％FBS生长液进行传代并制备细胞悬液，既操作方便，又有良好效果。 在同等条件下，用ST，pk15细胞对两个批次TGE病毒分别增殖，检测毒价。结果表明无论是用细胞增殖病毒，还是测毒价，ST细胞均较pk15细胞对TGEV敏感且增殖效果好。在病毒增殖时ST细胞较pk15细胞高2个滴度以上(4*105.6/4*103.0，4*104.6/4*101.4)，而在检测毒价时ST细胞较pk15细胞高1个滴度左右(4*105.6/4*104.6，4*103.0/4*101.4)。TGEV在ST、pk15细胞上CPE表现情况也验证了本试验结果。 在维护液中加一定量胰酶(每ml维护液加5ug)或增加血清含量对TGEV增殖效果影响不大，可忽略不计。 其二、猪传染性胃肠炎(TGE)病毒抗体的鉴定研究用血清中和试验(SN)和阻断酶联免疫吸附试验(B-ELISA)对来自美国、加拿大、丹麦的1401份血清进行比较检测。SN试验：41份阳性；B-ELISA试验：6份TGEV抗体阳性、35份PRCV抗体阳性。而且这41份阳性血清在两个试验中完全重合。这说明，用SN试验检测TGE病毒抗体，与PRCV抗体存在交叉反应，特异性不强。B-ELISA试验由于使用了单克隆抗体，能特异性检测、鉴定TGE抗体，进而区分TGE与PRCV感染。本研究成果已用于进出口动物政策制定，新签订议定书，要求用B-ELISA对TGE作最后鉴定，对过去签订的议定书进行了修订。

目录

摘要

第一部分：前言

一、病原学

二、分子生物学特性

三、抗原性

四、流行病学

五、传播和宿主

六、临床症状

七、发病机理

八、病理变化

九、诊断

十、治疗

十一、预防管理

十二、免疫预防

第二部分材料与方法

一、材料

1.TGE在组织细胞上增殖

2.TGE抗体的鉴定

二、方法

1.细胞培养的准备

2.病毒增殖与毒价测定

3.组织细胞制备对TGE病毒CPE的影响

4.ST、pk15传代细胞对TGEV的敏感性及增殖效果的研究

5.观察TGE毒株在ST、pk15细胞单层上CPE表现

6.维护液中加入一定量胰酶或不同浓度FBS对TGEV增殖影响

7.用血清中和试验(SN)检测TGE病毒抗体

8.运用阻断酶联免疫吸附试验（B-ELISA）鉴别诊断TGE与PRCV抗体

9.用血清中和试验（SN）和阻断酶联免疫吸附实验（B-ELISA）分别对81份进口种猪血清进行检测

第三部分：结果与分析

一、结果

1.组织细胞制备对TGE病毒CPE的影响

2、毒价测定

3.ST、pk15传代细胞对TGEV的敏感性及增殖效果的研究

4.TGE毒株在细胞单层上CPE表现

5.维护液成份改变对TGEV增殖影响

6.用血清中和试验(SN)检测TGE病毒抗体

7.运用(B-ELISA)鉴别诊断TGE与PRCV抗体

8.用SN和了B-ELISA同时对美国进口种猪81份血清进行检测

二、分析

小结

参考文献

致谢