生物大分子印迹电色谱整体柱的制备及分子印迹整体柱的热力学研究

摘要

蛋白质组学的研究是21世纪生命科学的焦点之一。探索新的分离分析方法和技术解决高丰度蛋白的去除和低丰度蛋白的富集是分离科学研究的重大课题。分子印迹技术和毛细管电色谱技术是近年来迅猛发展的高选择性的分离技术和高效的微分离技术。本文的研究目标是将这两种技术结合起来，探求蛋白质分离识别的新方法。立足于这两项技术，论文的研究内容包括： 1、以生物大分子．四肽(YPLG，MW=448.61)为模板分子成功地制备了毛细管印迹整体柱。以印迹整体柱的通透性和色谱行为为依据，结合扫描电镜图观察柱形貌，系统地研究了致孔剂、功能单体和交联剂的选择和比例，优化了制备条件。在电色谱模式下对印迹整体柱的性能(电渗流，柱效)进行了评价，考察了各种电色谱条件对模板分子及其结构类似物识别的影响。 2、采用抗原决定基法，首次合成了以催产素的抗原决定基(YPLG)为模板分子的毛细管印迹整体柱，催产素的印迹因子可达4.013。考察了各种电色谱条件(流动相中乙腈含量、缓冲溶液的pH和盐浓度)对催产素保留的影响。催产素和牛血清白蛋白、牛血红蛋白、溶菌酶以及卵清蛋白的分离表明，印迹整体柱对催产素具有专一的识别能力。 3、从有机聚合物基质和硅胶基质两方面，初步探索了利用抗原决定基法以九肽为模板分子的分子印迹整体柱的制备。研究了各种条件对反应速度和柱体通透性的影响。 4、以矩形前沿分析法研究了分子印迹整体柱的热力学行为。以原位聚合法制备了对．羟基苯甲酸印迹整体柱，通过测定热力学吸附等温线系统地考察了流动相中乙酸的含量、有机溶剂的性质和柱温对印迹整体柱吸附和选择能力的影响。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

第一节分子印迹技术及其应用

1.1.1分子印迹聚合物的基本原理

1.1.2分子印迹聚合物的应用

第二节生物大分子印迹聚合物

1.2.1肽和蛋白质的生物学功能

1.2.2生物大分子印迹的特点

1.2.3生物大分子印迹聚合物的制备方法

1.2.5生物大分子印迹聚合物的识别机理

1.2.6生物大分子印迹技术存在的问题以及应用前景

第三节分子印迹技术在毛细管电色谱中的应用

1.3.1毛细管电色谱简介

1.3.2不同类型毛细管分子印迹固定相的研究进展

1.3.3展望

第四节分子印迹聚合物的热力学行为研究

第五节选题意义及内容提纲

第二章四肽印迹毛细管整体柱的制备及电色谱研究

第一节引言

第二节YPLG毛细管印迹整体柱的制备

2.2.1实验方法

2.2.2各种制备条件对印迹整体柱性能的影响

第三节印迹整体柱的电色谱研究

2.3.1各种电色谱条件对电渗流的影响

2.3.2印迹整体柱柱效的研究

2.3.3模板分子不对称性的研究

第四节YPLG印迹整体柱分子识别的研究

2.4.1印迹整体柱对模板分子的选择性识别能力

2.4.2流动相组成对印迹整体柱分子识别的影响

第五节结论

第三章抗原决定基法制备的毛细管分子印迹整体柱分离蛋白的研究

第一节引言

第二节毛细管印迹整体柱的制备

3.2.1实验方法

第三节电色谱条件对催产素识别的影响

3.3.1模板分子的结构及印迹识别过程

3.3.2电色谱条件对催产素保留时间的影响

3.3.3印迹整体柱对模板分子和催产素的识别

3.3.4印迹整体柱对催产素的选择性识别

3.3.5印迹整体柱对催产素的检出灵敏度

第四节结论

第四章九肽印迹毛细管整体柱制备的探索

第一节引言

第二节有机聚合物基质印迹整体柱制备的探索

第三节硅胶基质印迹整体柱制备的探索

4.3.1模板分子的含量对聚合反应速度的影响

4.3.2磷酸盐缓冲溶液的pH对聚合速度的影响

4.3.3反应体系中加入十二烷基溴化钠(CTAB)对反应速度的影响

4.3.4反应温度对反应速度的影响

第四节小结

第五章前沿分析法研究分子印迹整体柱的热力学行为

第一节引言

第二节理论部分

5.2.1色谱方程

5.2.2平衡吸附模式

5.2.3初始和边界条件

第三节分子印迹整体柱的制备以及吸附等温线的测定

5.3.1试剂与仪器

5.3.2分子印迹整体柱的制备

5.3.3吸附等温线的测定

第四节结果与讨论

5.4.1对-羟基苯甲酸印迹整体柱的高效液相色谱评价

5.4.2突破曲线的测定

5.4.3模板分子及其结构类似物在对-羟基苯甲酸印迹整体柱上的吸附等温线

5.4.4流动相中乙酸含量对印迹聚合物上吸附能力和选择性的影响

5.4.5流动相中有机溶剂的性质印迹聚合物上吸附能力和选择性的影响

5.4.6温度对印迹聚合物吸附能力和选择性的影响

第五节结论

第六章总结

参考文献

致谢

个人简历 在学期间发表的学术论文和研究成果