利用单细胞PCR方法生产人源化单克隆抗体的探索

摘要

目的：抗体在免疫系统的功能中扮演着极为重要的角色。如何有效快速地生产抗体成为大家关心的问题。至1975年Milstein和Kohler所发明了经典的杂交瘤单克隆抗体生产方法以来，生产单克隆抗体的技术不断发展，至今已经有多种有效的生产单克隆抗体的方法，如杂交瘤技术，噬菌体展示技术等等。目前，基因工程抗体的研究非常火热，而且在实际生产中已经得到了应用。本文中，作者探讨一种非常新颖有效的人源化单克隆抗体生产的方法，揭示出这种方法的广阔前景。
　　 方法：本研究中的生产完全人源化单克隆抗体的方法是基于目前流行的基因工程抗体技术和单细胞PCR技术进行的。通过从免疫完成的患者体内取出外周血，分离外周血中的B细胞，并根据不同的实验课题特征分选出不同亚群的B细胞，将B细胞梯度稀释成单位体积1个细胞，然后将单位体积的细胞悬液加入到96孔细胞板中，直接裂解细胞，加入PCR体系进行多轮PCR以扩增出抗体分子的可变区。然后将此可变区克隆进包含有抗体其他部分基因的载体，共转染构建完成的轻链和重链载体进293T细胞，一定时间的培养后，收集细胞培养上清，检测并分离其中的抗体。
　　 结论：通过本研究的探索，发现用单细胞PCR的办法生产全人源化单克隆抗体的办法完全可行。通过对实验的改进，这种办法不仅可以用于科研寻找抗肿瘤单克隆抗体，也可以用于实际生产。单细胞PCR产生单克隆抗体的办法是一种很有前途的办法。