HOXD10基因在肝癌中表观遗传学改变及其对该基因表达的调控

摘要

背景：肝细胞癌(HCC)的发病率在恶性肿瘤中位居世界第五位，死亡率位居恶性肿瘤第三位，每年被确诊的HCC患者大约为564，000例。相关研究表明HCC的发病机制涉及表观遗传学和遗传学的改变，与二者关系密切。HOXD10基因定位于2q31.1。HOXD10蛋白作为转录调节因子，影响着机体多种不同的分子生物学过程，例如细胞凋亡，分化，细胞动力学和血管形成等。已有研究表明HOXD10基因在乳腺癌、胃癌和子宫内膜癌等肿瘤中表达缺失，恢复表达HOXD10可抑制乳腺癌、胃癌和垂体泌乳素瘤的增殖、侵袭和转移等功能。在原发性滤泡淋巴瘤和胃癌中HOXD10启动子区发生甲基化而导致基因表达缺失。但尚未有关于HOXD10在HCC中的表观遗传学变化的报道。
　　 目的：本研究的主要目的是检测HOXD10基因在肝细胞癌组织中的甲基化状态，并探讨HOXD10在肝癌中的表达是否受甲基化调控。
　　 方法：本次研究选取4株HCC细胞系，它们分别为HBxF344、Bel-7402、PLC/PRF/5和HepG2，皆由中国人民解放军总医院消化科提供。55例原发性肝细胞癌组织和5例正常肝组织皆取自中国人民解放军总医院。运用甲基化特异性PCR(MSP)方法，检测HOXD10基因在这4株细胞系中的甲基化状态。应用具有抑制甲基转移酶功能的5-aza-2-deoxycytidine（5-Aza-dC）处理HBxF344、Bel-7402、PLC/PRF/5和HepG2这4株肝癌细胞系，运用半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测这4株细胞系在药物处理前后，细胞内的HOXD10在mRNA水平的变化情况。最后用MSP方法检测肝细胞癌组织和正常肝组织标本内的HOXD10基因的甲基化状态，并结合组织标本临床资料，应用X2检验分析甲基化和各项临床指标的关系。
　　 结果：HOXD10基因在HBxF344、Bel-7402、PLC/PRF/5和HepG24株肝癌细胞系中均发生完全甲基化，且HOXD10的表达在这4个细胞株中均缺失，经甲基化酶抑制剂5-Aza-dC处理后HOXD10基因在这4个细胞系中均恢复表达。以上实验结果提示HOXD10基因的表达受到甲基化的调控。55例肝细胞癌组织标本中41例发生甲基化改变，甲基化率约为75％，而在5例正常肝组织样本中均未发现HOXD10基因发生甲基化变化(0％)。HOXD10的甲基化改变与肝癌患者的年龄，性别，病理分期和分化程度等因素之间无明显的相关性(P＞0.05)。
　　 结论：HOXD10基因的启动子区高甲基化是肝细胞癌的多发事件，甲基化在肝细胞癌中参与HOXD10基因的表达调控。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 引言

第一节 表观遗传学的背景

第二节 肝癌与表观遗传学

第三节 HOXD10基因背景

第二章 HOXD10在肝癌细胞系中的表达及甲基化改变

第一节 前言

第二节 材料和方法

2．2．1 实验材料

2．2．2 实验方法

第三节 结果

2．3．1 HOXD10基因在肝癌细胞系中的甲基化状态

2．3．2 HOXD10 mRNA在肝癌细胞系中的表达情况

2．3．3 去甲基化药物5-Aza-dC恢复肝癌细胞系中HOXD10 mRNA的表达

第四节 讨论

第五节 小结

第三章 HOXD10在肝癌组织中的甲基化改变

第一节 前言

第二节 材料及方法

3．2．1 实验材料

3．2．2 实验方法

第三节 结果

第四节 讨论

第五节 小结

第四章 结论

参考文献

致谢

个人简历