蜂胶中咖啡酸苯乙酯的提取及应用

摘要

咖啡酸苯乙酯作为天然产物——蜂胶的主要活性成分之一，在抗肿瘤、抗氧化、抗炎症、免疫调节等方面表现出独特的生理、药理作用，因此，咖啡酸苯乙酯成为近年来国内外蜂胶活性成分研究的一大热点。本论文旨在对以咖啡酸苯乙酯为主要功效成分的新药研发提供参考。 通过比对国内外大量文献资料，对蜂胶及蜂胶中的咖啡酸苯乙酯的药理学及药效学进行了初步探索。实验中通过测定蜂胶样块的乙醇提取物含量、杂质和蜂蜡含量、碘值、氧化时间、酚类化合物含量及黄酮类化合物定性反应确定了供试蜂胶样块的等级。通过测定蜂胶中咖啡酸苯乙酯的原始含量确定选用来自中国河北的蜂胶样品。确定了从蜂胶中提取中等浓度的咖啡酸苯乙酯的材料和方法，选定了所需的萃取溶剂、反应温度、超声浸提时间、固液倍比柱层析反应参数等实验参数，提出了一种经济适用的从蜂胶中提取咖啡酸苯乙酯的工艺。建立了咖啡酸苯乙酯的反相高效液相色谱测定方法，并完成了其反相高效液相色谱的方法学研究。进行了咖啡酸苯乙酯的抗菌实验，测定其抑菌圈和最低抑菌浓度。对咖啡酸苯乙酯提取样品进行毒理学研究，测得了小白鼠的半数至死剂量。用咖啡酸苯乙酯的提取物制作了胶囊，并对胶囊进行了检测。 本实验中设计的提取工艺可以有力的分离出蜂胶中的咖啡酸苯乙酯，咖啡酸苯乙酯成品的含量为48.75％，与原蜂胶样品中咖啡酸苯乙酯的含量2.63％(26.352 medg)相比，咖啡酸苯乙酯含量扩大将近20倍，产品得率为2.38％，提取效率为44.2％。由此可见，本实验所设计的工艺路线对从蜂胶中提取中等浓度的咖啡酸苯乙酯完全可行。实验中建立的高效液相色谱测定方法可以准确测定出样品中咖啡酸苯乙酯的含量。咖啡酸苯乙酯提取物具有较强的抗菌活性和较低的毒性。本实验中制备的咖啡酸苯乙酯样品制成的胶囊符合中国药典规定。

目录

文摘

英文文摘

声明

1.引言

1.1蜂胶及其应用

1.1.1蜂胶的理化性质

1.1.2蜂胶的生物学活性

1.2咖啡酸苯乙酯及其应用

1.2.1咖啡酸苯乙酯的理化性质

1.2.2咖啡酸苯乙酯的生物学活性研究现状

1.3咖啡酸苯乙酯制备方法的研究进展

1.3.1二氧化碳超临界萃取法简介

1.3.2制备型高效液相色谱法简介

2.实验材料、药品和设备

2.1实验材料

2.2实验药品

2.3主要仪器及器材

3.蜂胶样品中提取咖啡酸苯乙酯方法和过程

3.1 RP—HPLC测定咖啡酸苯乙酯色谱条件的选择

3.2蜂胶样品来源的确定

3.2.1蜂胶样块的等级评定

3.2.2蜂胶样品来源的确定

3.3蜂胶中提取咖啡酸苯乙酯工艺的探索

3.3.1蜂胶除杂质方法的尝试

3.3.2反应温度的预定

3.3.3超声浸提时间的预定

3.3.4萃取溶剂及萃取步骤的预定

3.3.5咖啡酸苯乙酯半成品的制备

3.3.6柱层析提纯咖啡酸苯乙酯半成品

3.3.7蜂胶样品中咖啡酸苯乙酯提取工艺的确定

3.3.8咖啡酸苯乙酯样品的制备

4.蜂胶样品中提取咖啡酸苯乙酯结果和讨论

4.1蜂胶样品来源确定的结果

4.1.1蜂胶样块的等级评定的结果

4.1.2蜂胶样品来源确定的结果

4.2蜂胶中提取咖啡酸苯乙酯工艺的探索的结果

4.2.1蜂胶常规除蜡方法的尝试结果与讨论

4.2.2反应温度的预定结果与讨论

4.2.3超声浸提时间预定的结果与讨论

4.2.4萃取溶剂及萃取步骤的预定结果及讨论

4.2.5正交实验

4.2.6咖啡酸苯乙酯半成品制备的结果

4.2.7柱层析提纯咖啡酸苯乙酯半成品的结果和讨论

4.3蜂胶样品中咖啡酸苯乙酯提取工艺的确定

4.4咖啡酸苯乙酯样品的制备

5.咖啡酸苯乙酯的RP—HPLC方法学研究

5.1仪器与试剂

5.2样品

5.3色谱条件

5.3.1色谱条件的选择

5.3.2色谱条件的确定

5.4标准溶液的配制

5.5标准曲线的制备

5.6精密度的测定

5.7样品制备

5.8重现性实验

5.9加样回收率韵测定

5.10利用HPLC法测算咖啡酸苯乙酯含量过程中的相关计算方法

5.10.1咖啡酸苯乙酯样品溶液中咖啡酸苯乙酯浓度的计算

5.10.2咖啡酸苯乙酯样品(干品)中咖啡酸苯乙酯含量的计算

5.10.3咖啡酸苯乙酯样品(干品)得率

6.咖啡酸苯乙酯样品抗菌实验

6.1实验材料

6.1.1供试材料

6.1.2试剂

6.1.3培养基

6.2方法与过程

6.2.1样品的制备

6.2.2抗菌活性测定

6.2.3咖啡酸苯乙酯最低抑菌浓度测定

6.3结果和讨论

6.3.1抗菌活性的测定

6.3.2咖啡酸苯乙酯最低抑菌浓度测定

7.咖啡酸苯乙酯提取样品急性毒理实验

7.1实验材料

7.2方法与过程

7.3现象及结论

8.胶囊的制作

8.1灌装胶囊

8.2胶囊检测

8.2.1胶囊最低装量检测

8.2.2水分检测

8.2.3炽灼残渣检测

8.2.4重金属检测

8.2.5砷盐检测

8.2.6体外崩解检测

8.2.7微生物检验

8.3胶囊检测结果

8.3.1胶囊最低装量检测结果

8.3.2水分检测结果

8.3.3炙灼残渣检测结果

8.3.4重金属检测结果

8.3.5砷盐检测结果

8.3.6胶囊崩解时间检测结果

8.3.7微生物检测结果

9.结论

10.实验的创新、难点、不足及进一步研究的方向

参考文献

致谢

附录：实验照片