无花果多糖的提取及其对鲫鱼非特异性免疫功能影响的研究

摘要

植物多糖（plant polysaccharides）又称植物多聚糖，是广泛存在于植物中由许多相同或不同的单糖以α-或β-糖苷键所组成的化合物，参与生物体中细胞的各种活动，具有调节免疫、抗菌、抗肿瘤、抗病毒、降血糖、降血脂、抗氧化等重要生物活性。本项目研究了从多种植物中进行多糖的提取及对鲫鱼非特异性免疫功能的影响，结果发现无花果多糖具有明显的增强鲫鱼非特异性免疫功能的作用，并对无花果多糖的提取和分离工艺以及调节鲫鱼非特异性免疫功能的最佳剂量进行了探讨，主要结果如下： 将无花果多糖、板蓝根多糖和五味子多糖以500mg/kg基础日粮的剂量分别添加到基础日粮中饲喂40±2g鲫鱼，于饲喂后的第0、7、14、21d用考马斯亮蓝法和MTT染色法等进行免疫学指标测定，采用1×108CFU/ml嗜水气单胞菌接种受试鲫鱼，结果显示：三种植物多糖均对鲫鱼非特异性免疫功能有促进作用，血液中白细胞吞噬活性和杀菌活性与对照组相比差异极其显著（P<0．01），无花果多糖和板蓝根多糖能显著促进血清总蛋白的合成和溶菌酶活性（P<0．05），无花果多糖组受试鲫鱼接种嗜水气单胞菌后死亡率最低，具有最明显的增强鲫鱼非特异性免疫功能的作用。 通过正交优化试验，得出无花果多糖提取的最佳工艺为：温度80℃，料液比1：9，回流提取3h，并重复提取一次；乙醇沉淀法分离无花果多糖最佳工艺为：浓缩比例为1：1，加入无水乙醇至终末浓度为60％，静置沉淀18h。多糖含量为69．7％，多糖得率为19．34％。经DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换层析和0．1mol/LPBS（pH8．0）透析后，FCPS-1（Ficus carica polysaccharides-1）含量79．7％，得率为0．107％：FCPS-2（Ficus carica polysaccharides-2）含量为93．4％，得率为5．133％。 以40±2g的鲫鱼为实验对象，在其基础日粮中分别添加剂量为0（A0组）、0．1％（A1组）、0．2％（A2组）、0．4％（A3组）、0．8％（A4组）的无花果多糖，并于0d、7d、14d、21d、28d、35d检测鲫鱼血清中补体C3含量、总蛋白含量、溶菌酶活性、SOD酶活性和血液中白细胞吞噬活性和杀菌活性。结果表明，A2组的补体C3含量、总蛋白含量、溶菌酶活力、SOD酶活性和血液白细胞吞噬活性和杀菌活性在第14d和21d显著高于A0组（P<0．05）；A3组补体C3含量、SOD酶活性和血液白细胞吞噬活性第14d时达峰值，与A0组相比差异极其显著（P<0．01），与A1组、A4组相比差异显著（P<0．05）；其血清中总蛋白含量和溶菌酶活力均在第14天时达到峰值，与对照组差异显著（P<0．05）：A3组补体C3含量、总蛋白含量、溶菌酶活力、SOD酶活性和血液中白细胞吞噬活性和杀菌活性与A2组相比差异不显著，但优于A2组。A0组、A1组、A4组之间的血清中补体C3含量、总蛋白含量、溶菌酶活力、SOD酶活性和血液中白细胞吞噬活性和杀菌活性在各时间点均无显著差异。实验结果得出无花果多糖增强鲫鱼非特异性免疫功能在日粮中最适添加量为0．4％。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：论文缩略词表

声明

一、文献综述

1 植物多糖作为免疫调节剂的研究进展

1.1 植物多糖的概念和分类

1.2 免疫调节剂的概念和分类

1.3 植物多糖的免疫调节作用机制

1.4 植物多糖的免疫调节作用

1.5 植物多糖其它作用的研究进展

1.6 多糖类免疫调节剂在水产动物上的研究进展

2 研究目的与意义

二、三种植物多糖对鲫鱼非特异性免疫功能的调节研究

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.2 多糖的提取和鉴定

1.3 试验动物与日粮

1.4 试验设计与管理

1.5 测定指标

1.6 数据处理

2 结 果

2.1 三种PPS对鲫鱼血清总蛋白含量的影响

2.2 三种PPS对鲫鱼血清溶菌酶活性的影响

2.3 三种PPS对鲫鱼血液白细胞吞噬活性的影响

2.4 三种PPS对鲫鱼血液白细胞杀菌活性的影响

2.5 三种PPS对接种嗜水气单胞菌后鲫鱼死亡率的影响

3 讨论

3.1 三种PPS对鲫鱼血清总蛋白含量的影响

3.2 三种PPS对鲫鱼血清溶菌酶活性的影响

3.3 三种PPS对鲫鱼白细胞吞噬活性和杀菌活性的影响

3.4 三种PPS对接种嗜水气单胞菌后鲫鱼死亡率的影响

4小 结

三、无花果多糖的提取分离和纯化工艺研究

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果与分析

2.1 葡萄糖标准曲线的绘制

2.2 提取无花果多糖正交实验结果与分析

2.3 分离无花果多糖正交试验结果与分析

2.4 无花果多糖的纯化

2.5 无花果多糖的含量测定

3 讨论

3.1 多糖含量的测定

3.2 除蛋白质的选择

3.3 最佳提取工艺的选择

3.4 无花果多糖的层析分离

4 小结

四、无花果多糖对鲫鱼非特异性免疫功能的影响

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.2 试验设计与日粮制作

1.3 饲养管理

1.4 测定指标

1.5 数据处理

2 结果

2.1 添加不同剂量的无花果多糖对鲫鱼血清总蛋白含量的影响

2.2 添加不同剂量的无花果多糖对鲫鱼血清补体C3含量的影响

2.3 添加不同剂量的无花果多糖对鲫鱼血清SOD酶活性的影响

2.4 添加不同剂量的无花果多糖对鲫鱼血清溶菌酶活性的影响

2.5 添加不同剂量的无花果多糖对鲫鱼血液白细胞吞噬活性的影响

2.6 添加不同剂量的无花果多糖对鲫鱼血液白细胞杀菌活性的影响

2.7 添加不同剂量的无花果多糖对接种嗜水气单胞菌后鲫鱼死亡率的影响

3 讨论

3.1 无花果多糖对鲫鱼血清总蛋白含量的影响

3.2 无花果多糖对鲫鱼血清补体C3含量的影响

3.3 无花果多糖对鲫鱼血清超氧化物歧化酶活性的影响

3.4 无花果多糖对鲫鱼血清溶菌酶活性的影响

3.5 无花果多糖对鲫鱼血液白细胞吞噬活性的影响

3.6 无花果多糖对鲫鱼血液白细胞杀菌活性的影响

3.7 无花果多糖对接种嗜水气单胞菌后鲫鱼死亡率的影响

4 小 结

五、结论

参考文献

致谢