猪细小病毒WH-1株疫苗病毒增殖培养条件优化研究

摘要

本研究用猪细小病毒WH-1株试制疫苗，在遵循《猪细小病毒(WH-1株)灭活疫苗生产与检验规程》的前提下，通过对一系列影响病毒效价的因素进行优化，最终确定了最优的病毒增殖培养条件。
　　 不同细胞系对病毒效价的影响：用IBRS-2细胞与PK-15细胞分别接毒，结果表明猪细小病毒WH-1株在IBRS-2与PK-15细胞上生长增殖收获的病毒效价没有显著差异(P＞0.05)。猪细小病毒WH-1株适合在IBRS-2与PK-15细胞上生长增殖，但IBRS-2更容易传代，所以选择其进行下一步试验。
　　 不同培养方法对病毒效价的影响：用静置培养的IBRS-2扁瓶细胞4瓶和旋转培养的转瓶细胞4瓶分别接毒，结果表明扁瓶静置培养方法收获的病毒效价显著高于转瓶旋转培养方法(P＜0.05)。但是从生产角度上说，转瓶旋转培养更适用，因此选择转瓶旋转培养进行下一步试验。
　　 不同体积培养液对病毒效价的影响：用IBRS-2细胞接种猪细小病毒WH-1株，各试验组加入培养液体积分别为1000ml/瓶、1200ml/瓶、1500ml/瓶。结果表明每瓶加入1000ml培养液收获的病毒液效价最低，显著低于1200ml和1500ml(P＜0.05)，而每瓶加入1200ml和1500ml培养液收获的病毒液效价没有显著差异(P＞0.05)。但是从生产实践来看，每瓶加入1500ml的产量更高，能够提高生产效能。
　　 培养液中不同血清浓度对病毒液效价影响：用IBRS-2细胞接种猪细小病毒WH-1株，各试验组加入培养液的血清浓度分别加入8％、10％、12％。结果表明培养液的血清浓度为8％收获的病毒液效价显著低于10％和12％收获的病毒液(P＜0.05)，但10％和12％两者收获的病毒液效价无显著差异(P＞0.05)。从节约生产成本和提高疫苗品质的角度来说，应该选择10％。
　　 不同生长时间的细胞对病毒效价的影响：分别选取生长24h、48h、72h的IBRS细胞接毒，结果表明生长时间为24h的细胞所产病毒效价显著低于生长时间为72h的细胞(P＜0.05)，而生长时间为72h的细胞病毒效价显著低于生长时间为48h的细胞(P＜0.05)。由此可见，选择生长时间为48h的细胞进行接毒，可以获得效价最高的病毒液。
　　 病毒液的免疫原性测定：在试验生产的病毒液中，选择效价达到规程标准要求（105.5TCID50/ml）的病毒液6批，并分为效价较低组和效价较高组，两者病毒效价差异显著(P＞0.05)。将上述挑选的病毒液分别进行灭活、配苗和乳化，分别用豚鼠和猪进行免疫原性测定。用豚鼠进行的免疫原性检验结果表明效价较低组和效价较高组试制成疫苗后，免疫原性没有显著差异(P＞0.05)，都完全可达到该疫苗的标准要求；用猪进行的免疫原性检验结果也可得出一致结论。

目录

文摘

英文文摘

1 前言

1.1 猪细小病毒病概述

1.1.1 病原学

1.1.2 流行病学

1.1.3 临床症状

1.1.4 致病机理

1.1.5 病理变化

1.1.6 诊断

1.1.7 防制

1.2 猪细小病毒病疫苗研究进展

1.2.1 灭活疫苗

1.2.2 弱毒疫苗

1.2.3 基因工程亚单位疫苗

1.2.4 基因工程活病毒载体疫苗

1.2.5 基因疫苗

1.3 本研究的目的和意义

2 材料和方法

2.1 试验材料

2.1.1 病毒

2.1.2 细胞

2.1.3 培养基

2.1.4 试剂

2.1.5 主要仪器设备

2.1.6 实验动物

2.2 试验方法

2.2.1 无菌检验[59]

2.2.2 病毒含量测定

2.2.3 HI试验

2.2.4 不同细胞系对病毒效价的影响

2.2.5 不同培养方法对病毒效价的影响

2.2.6 不同体积培养液对病毒效价的影响

2.2.7 培养液中不同血清浓度对病毒液效价影响

2.2.8 不同生长时间的细胞对病毒效价的影响

2.2.9 病毒液的免疫原性测定

2.2.10 试制疫苗的安全检验

2.2.11 数据处理

3 试验结果与分析

3.1 不同细胞系对病毒效价的影响

3.2 不同培养方法对病毒效价的影响

3.3 不同体积培养液对病毒效价的影响

3.4 培养液中不同血清浓度对病毒液效价影响

3.5 不同生长时间的细胞对病毒效价的影响

3.6 病毒液的免疫原性测定

3.7 试制疫苗的安全检验

4 讨论

5 结论

参考文献

致谢