辣椒遗传多样性的RAPD和ISSR分析

摘要

本试验采用30份辣椒种质材料，调查了其平均株高、茎粗、第一开花节位、单果重、果长、果径7个植物学性状和果实特性，运用改良CTAB法提取了辣椒种质材料的基因组DNA，进行了DNA质量和纯度的检测，并利用正交设计对RAPD和ISSR的反应体系进行了优化。用筛选出的12对RAPD引物和11对ISSR引物对基因组DNA进行扩增，并用NTSYS-pc(2.10)软件对其遗传多样性进行了聚类分析。得出的主要结果如下：
　　 1、通过对辣椒种质材料7个形态学性状的测量，用SPSS11.5软件将30份辣椒种质材料分为了8大类。
　　 2、本试验利用改良CTAB法提取辣椒种质材料的DNA，所提取的DNA质量较好、纯度较高。
　　 3、通过正交设计优化建立了适合辣椒种质材料分析的RAPD和ISSR反应体系。RAPD最优反应体系总体积为20μL，其中10×PCRbuffer溶液2.0μL、25μmol/LMgCL2溶液1.5μL、2mmol/L的dNTPs溶液2.0μL、10μmol/L随机引物1.0μL、50ng/μL模板DNA1.0μL、2.5U/μL TaqDNA聚合酶0.4μL，并加20μL石蜡油覆盖。PCR扩增程序为94℃预变性3min;94℃变性60S，37℃复性90S，72℃延伸120S，35个循环；最后在72℃延伸10min。ISSR反应体系总体积为20μL，其中10×PCR buffer溶液2.0μL、25μmol/L MgCl2溶液1.5μL、2mmol/L的dNTPs溶液2.0μL、10μmol/L随机引物1.0μL、50ng/μL模板DNA1.0μL、2.5U/μL TaqDNA聚合酶0.5μL，20μL石蜡油覆盖。扩增程序为94℃预变性3min;94℃变性45S，48℃-56℃复性90S，72℃延伸120S，35个循环；最后72℃延伸10min。
　　 4、用NTSYS-pc(2.10)软件对30份辣椒种质材料的RAPD和ISSR扩增图谱进行聚类分析表明：用ISSR引物对辣椒种质材料扩增出的条带遗传多态性明显高于RAPD，即ISSR分子标记更适合用于辣椒种质材料的遗传多样性研究；通过综合比较分析也得出：与RAPD分子标记相比，用ISSR分子标记对辣椒种质材料进行分类更接近于形态学聚类。

目录

文摘

英文文摘

1 前言

2 文献综述

2.1 生物多样性

2.2 遗传多样性的研究

2.2.1 遗传多样性的概念

2.2.2 遗传多样性的研究意义

2.3 检测遗传多样性的主要方法

2.3.1 形态标记

2.3.2 细胞标记

2.3.3 生化标记

2.3.4 分子标记

3 研究的目的和意义

4 材料和方法

4.1 试验材料

4.2 试验试剂和仪器

4.2.1 试验试剂

4.2.2 试验仪器

4.3 形态学性状调查

4.4 DNA提取和检测

4.4.1 DNA提取

4.4.2 DNA的质量检测

4.4.3 DNA纯度及含量测定

4.5 RAPD扩增反应

4.5.1 RAPD体系的建立及优化

4.5.2 引物的筛选

4.5.3 电泳

4.6 ISSR扩增反应

4.6.1 ISSR体系的建立及优化

4.6.2 引物的筛选

4.6.3 电泳

4.7 扩增产物的电泳分析

4.8 RAPD和ISSR数据统计

5 结果与分析

5.1 辣椒形态学分析

5.2 基因组DNA的提取及质量检测

5.3 RAPD结果分析

5.3.1 RAPD-PCR反应体系优化

5.3.2 RAPD引物的筛选

5.3.3 RAPD扩增产物的多态性分析

5.3.4 供试材料间遗传相似系数及聚类分析

5.4 ISSR结果分析

5.4.1 ISSR-PCR反应体系优化

5.4.2 ISSR引物的筛选

5.4.3 ISSR扩增产物的多态性分析

5.4.4 供试材料间遗传相似系数及聚类分析

6 讨论

6.1 DNA提取

6.2 ISSR和RAPD反应体系

6.3 形态学、RAPD与ISSR聚类分析的比较

6.4 ISSR与RAPD两种分子标记的比较

7 结论

参考文献

附录：

致谢