LXR激活剂对鹅肝细胞VLDL-TG组装与分泌途径相关基因表达的影响

摘要

肝细胞内合成的甘油三酯要组装成极低密度脂蛋白VLDL的形式才能分泌到血液参与循环利用，肝细胞内VLDL-TG组装与分泌减少是引起甘油三酯大量沉积的原因之一。本试验以30日龄四川白鹅原代肝细胞为实验材料，通过添加不同浓度的LXR激活剂，检测四川白鹅肝细胞内、外TG含量和细胞外VLDL浓度的变化，并且应用实时荧光定量PCR检测SCD1、FoxO1、MTTP、LXRα、LPL、DGAT1、DGAT2、apoB基因的表达变化情况。获得以下主要结果：
　　 (1)0.01、0.1、1和10μmol/LLXR激活剂T0901317处理四川白鹅原代肝细胞后，与对照组相比，随LXR激活剂T0901317浓度的增加细胞内TG含量呈增长趋势，其中0.01μmol/LLXR激活剂T0901317对细胞内TG含量的诱导效果不显著（P＞0.05），0.1、1和10μmol/LLXR激活剂T0901317能显著增加细胞内的TG含量(p＜0.05)。
　　 (2)0.01、0.1、1和10μmol/LLXR激活剂T0901317处理四川白鹅原代肝细胞后，与对照组相比都能增加细胞外TG的含量，其中0.01和0.1μmol/LLXR激活剂T0901317对细胞外TG含量诱导效果不显著（P＞0.05），而1和10μmol/LLXR激活剂T0901317能显著增加细胞外TG的含量(p＜0.05)，其中1μmol/LLXR激活剂T0901317对细胞外TG的诱导效果最佳。
　　 (3)0.01、0.1、1和10μmol/LLXR激活剂T0901317处理四川白鹅原代肝细胞后，与对照组相比都显著增加细胞外VLDL的浓度。其中1μmol/LLXR激活剂T0901317对细胞外VLDL浓度的诱导效果最佳。
　　 (4)0.01、0.1、1和10μmol/LLXR激活剂T0901317处理四川白鹅原代肝细胞后，与对照组相比LXR激活剂T0901317对VLDL-TG组装与分泌相关基因的表达有显著影响，随LXR激活剂T0901317浓度的增加LXRα、DGAT1、LPL和SCD1基因mRNA表达量呈增长趋势；MTTP、DGAT2、FoxO1和apoB基因mRNA表达量也都有所增加，其中1μmol/LLXR激活剂T0901317对MTTP、DGAT2、FoxO1和apoB基因mRNA表达量的诱导效果最佳。
　　 (5)相关分析表明，胞内TG的含量与LXRα、DGAT1、LPL和SCD1基因mRNA表达量极显著相关，相关系数分别为0.990、0.998、0.985和0.991(P＜0.01);胞外TG的含量与MTTP基因mRNA表达量极显著相关，相关系数为0.983(P＜0.01)，并与DGAT2、apoB基因mRNA表达量显著相关，相关系数分别为0.936、0.957(P＜0.05)：分泌到胞外的VLDL与apoB、LPL基因mRNA表达量显著相关，相关系数分别为0.892、0.886(P＜0.05)。

目录

文摘

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项目基金资助

符号说明

前言

1 文献综述

1.1 甘油三酯与VLDL-TG组装与分泌的关系

1.2 在VLDL-TG组装与分泌过程中起重要作用的几个因子

1.2.1 SCD1与DGAT在VLDL-TG组装与分泌中的作用

1.2.2 apoB与MTTP在VLDL-TG组装与分泌中的作用

1.2.3 FoxO1在VLDL-TG组装与分泌中的作用

1.3 LXR激活剂在VLDL -TG组装与分泌途径中的作用

1.3.1 LXR激活剂对SCD1和DGAT的调控作用

1.3.2 LXR激活剂对apoB和MTTP的调控作用

1.3.3 LXR激活剂与FoxO1间的相互调控作用

1.4 本实验的目的及意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 主要仪器

2.1.3 主要试剂盒与试剂

2.1.4 主要试剂配制

2.2 实验方法

2.2.1 鹅肝细胞分离及培养

2.2.2 MTT法测定鹅原代肝细胞活性

2.2.3 细胞内外TG含量的测定

2.2.4 胞外VLDL浓度的测定

2.2.5 基因表达检测

2.2.6 实验数据分析

3 结果

3.1 LXR激活剂对肝细胞活性的影响

3.2 LXR激活剂对肝细胞内、外TG浓度的影响

3.3 LXR激活剂对肝细胞外VLDL浓度的影响

3.4 LXR激活剂对VLDL组装和分泌相关基因表达的影响

3.4.1 各处理细胞总RNA的提取与反转录

3.4.2 实时定量引物特异性鉴定

3.4.3 不同浓度LXR激活剂对相关基因表达的影响

3.5 各基因表达量与胞内TG、胞外TG、胞外VLDL的关系

4 讨论

4.1 LXR激活剂对鹅肝细胞VLDL-TG分泌的影响

4.2 LXR激活剂对鹅肝细胞VLDL-TG组装与分泌的分子机制

4.2.1 SCD1与DGAT在LXR激活剂对鹅肝细胞VLDL-TG组装与分泌中的作用

4.2.2 MTTP在LXR激活剂对鹅肝细胞VLDL-TG组装与分泌中的作用

4.2.3 LPL在LXR激活剂对鹅肝细胞VLDL-TG组装与分泌中的作用

4.2.4 FoxO1在LXR激活剂对鹅肝细胞VLDL-TG组装与分泌中的作用

5 结论

参考文献

致谢

硕士研究生学习期间参与科研项目及发表文章