齐口裂腹鱼无乳链球菌的分离鉴定及其感染的病理学研究

摘要

无乳链球菌（Streptococcus agalactiae），又称为B群链球菌，是一种典型的人-兽-鱼共患病原菌，普遍存在于世界各地，严重威胁着人类和动物的健康。自1958年日本首次报道虹鳟感染链球菌的病例后，相继有大量的关于无乳链球菌感染养殖鱼和野生鱼类的报道，给世界养殖业造成巨大的经济损失。2012与2013年的7～10月四川齐口裂腹龟养殖场流行一种临床特征为突眼、体表出血和神经症状的传染病，在肝、肾涂片检查中发现链状G+球菌。从自然发病鱼肝、肾分离到2株形态与涂片检查一致的G+链状球菌(DML120817、YZH130830)，其在BHI平板上28℃培养48h，形成白色圆形、表面光滑、边缘整齐的针尖大小菌落;根据分离菌株的形态学和生理生化检测结果初步判定其为无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）;16S rRNA基因序列分析表明，2分离株（GenBank登录号:KF773744、KF761304）与GenBank中Sagalactiae16S rDNA序列同源性达96.5％以上，在以分离菌16S rDNA序列(GenBank登陆号KF773744与KF761304)及其GenBank中同源性较高的链球菌16S rDNA序列构建的系统发育树上，分离菌与S.agalactiae聚为一族;同时在基于无乳链球菌cfb基因进行的特异性PCR检测中，分离菌均为阳性。
　　对自然感染鱼进行病理剖解观察其眼观病变，同时取心、肝脏、肾脏、脾脏、肠、脑、肌肉和鳃等组织，10％甲醛溶液固定，常规石蜡切片，观察无乳链球菌感染造成的病理损伤。结果表明，感染鱼主要表现突眼、体表出血和神经症状的临床表现;病理组织学观察发现，S.agalactiae感染齐口裂腹鱼对多组织器官都造成明显的病理损伤，尤其是肝、肾、脾、和脑的损伤较为严重，表现为明显的变性、坏死以及炎症细胞浸润，主要表现为肝炎、急性脾炎、间质性肾炎、脑膜脑炎、心外膜炎。
　　超微结构上，球状的S.agalactiae侵入肝细胞、肾小管上皮细胞、肾间质、脾髓、淋巴细胞与脑内，部分细菌见荚膜形成，被侵袭细胞的线粒体肿胀，嵴断裂，溶解，内质网扩张，甚至细胞器结构完全破坏，溶解，细胞膜破裂溶解。脑内胶质细胞增生，核膜扩张，神经纤维髓鞘变性，溶解。同时在肝毛细血管与肝血窦内，肝、脾和肾间质的巨噬细胞与内皮细胞内见多量菌体，且一些菌体处于分裂状态。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1 无乳链球菌的分类地位

2 无乳链球菌的生物学特性

2．1 形态与培养特性

2．2 生化特性

3 无乳链球菌的致病性

3．1 无乳链球菌主要的危害

3．2 各宿主间无乳链球菌关系

3．3 无乳链球菌的毒力因子

3．4 无乳链球菌病的防治

4 齐口裂腹鱼的分类地位

5 齐口裂腹鱼的生物学特性

5．1 形态特征

5．2 生活习性及食性

6 我国齐口裂腹鱼的养殖现状

7 养殖齐口裂腹鱼中的常见疾病

7．1 真菌性疾病

7．2 寄生虫性疾病

7．3 细菌性疾病

8 研究目的和意义

第二章 无乳链球菌(S．agalactiae)自然感染齐口裂腹鱼的分离鉴定

1 材料

1．1 试验动物

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

2 方法

2．1 病鱼的采集

2．2 剖解及涂片检查

2．3 病原菌的分离

2．4 病原菌的表型特征

2．5 回归感染试验

2．6 16S rRNA序列扩增和系统发育分析

2．7 无乳链球菌cfb基因的PCR检测

3 结果

3．1 临床症状和触片检查

3．2 病原菌的分离

3．3 病原菌的表型特征

3．4 16S rDNA扩增结果和发育树分析

3．5 回归感染试验

3．6 S．agalactiae cfb基因的PCR检测

4 讨论

第三章 齐口裂腹鱼感染无乳链球菌的病理形态学研究

1．材料

1．1 试验动物

1．2 试验试剂

1．3 主要设备

2 试验方法

2．1 眼观检查

2．2 组织病理学观察

2．3 超微病理学观察

3 结果

3．1 临床特征与剖解病变

3．2 病理组织学变化

3．3 超微病理学变化

4 讨论

4．1 S．agalactiae感染鱼类的临床特征

4．2 S．agalactiae感染鱼类的组织病理特点

4．3 S．agalactiae感染齐口裂腹鱼的致病机理

第四章 结论

参考文献

致谢