发情期大熊猫阴道真菌的分离鉴定及所含酵母菌的药敏分析

摘要

目的:大熊猫源于中国，是世界上最稀有和受到最大生存威胁的哺乳动物之一。随着人类生存地域的扩张，大熊猫的栖息地环境被破坏，对大熊猫圈养成为保护大熊猫和提高其繁殖率的必要措施。微生物是许多直接或间接影响动物繁殖及相关疾病的原因。真菌作为阴道中微生物的重要组成，时常引发如念珠菌性阴道炎等疾病，也引起动物流产、死胎等繁殖障碍。阴道内真菌存在状况越来越引起人们的关注和研究。为了科学保护大熊猫，提高大熊猫的繁殖率，弄清发情期大熊猫阴道内可培养真菌的种类及对药物的敏感性，为大熊猫的生殖道合理用药提供参考。
　　方法:通过对成都大熊猫繁育研究基地的10只发情期雌性大熊猫（成绩、北川、蜀兰、庆贺、娅仔、晶晶、大娇、萌萌、娅双、小丫头）阴道分泌物进行真菌分离培养、形态学鉴定;通过真菌ITS序列通用引物ITS1、ITS4对分离真菌进行PCR扩增、序列测定，再在NCBI BLAST比对其ITS序列基因相似性，提交其序列。并对各真菌进行分析，找出对大熊猫阴道健康或生殖有威胁菌种。选取5种抗真菌药（两性霉素B、制霉菌素、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑）通过丹麦Rosco纸片扩散法对大熊猫发情期阴道分泌物中分离到的5种酵母菌:链状假丝酵母菌（Candida catenulata）、担子菌类酵母菌（Pseudozyma aphidis）、季也蒙毕赤氏酵母菌（Pichia guilliermondii）、汉氏德巴利氏酵母菌（Debaryomyces hansenii皮状丝孢酵母菌（Trichosporon cutaneum）进行药敏试验。
　　结果:本次试验共分离到30种不同真菌，包含25种霉菌，5种酵母菌。10只大熊猫中有4只(40％)均有青霉属（Penicillium spp.），2(20％)只有曲霉属（Aspergillus spp.），3只(30％)有杂色曲霉（Aspergillus versicolor），3只(30％)有枝孢样枝孢霉（Cladosporiumcladosporioides）。5种酵母菌均对两性霉素B、制霉菌素敏感;Trichosporon cutaneum对酮康唑、伊曲康唑中度敏感，Debaryomyces hansenii对伊曲康唑中度敏感，Candidacatenulata对氟康唑中度敏感，对酮康唑、伊曲康唑耐药。
　　结论:试验结果表明发情期大熊猫阴道可培养真菌种类主要为霉菌(83.33％)，酵母菌较少(16.67％)。Penicillium spp.、Aspergillus spp.（特别是Aspergillus versicolor）及Cladosporium cladosporioides可能是熊猫阴道中的定殖菌种;6种霉菌:球毛壳菌（Chaetomium globosum）、杂色曲霉（Aspergillus versicolor）、互隔交链孢霉（Alternariaalternata）、枝孢样枝孢霉（Cladosporium cladosporioides）、马尔尼菲青霉（Penicilliummarneffe）、层生镰刀霉（Fusarium proliferatum）和1种酵母菌:链状假丝酵母菌(C.catenulata)可能对大熊猫健康或繁殖存在威胁。两性霉素B和制霉菌素是临床治疗由本研究中5种酵母菌引起的大熊猫阴道疾病的首选药。

目录

论文说明

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摘要

英文缩写词表

第一章 文献综述

1．真菌的概况

1．1 真菌的定义

1．2 真菌的分类学地位

1．3 真菌的分类

1．4 真菌的鉴定方法

1．5 真菌对动物的危害性

2．人阴道真菌的研究概况

3．动物真菌的研究概况

4．大熊猫源真菌研究概况

5．真菌的耐药性

6．结语

第二章 发情期大熊猫阴道可培养真菌的分离鉴定

1．材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 试验结果

2．1 真菌的形态学

2．2 电泳结果

2．3 真菌鉴定结果

2．4 大熊猫生殖情况

3 讨论

3．1 真菌组成宏观分析

3．2 鉴定方法的优缺点

3．3 样品出现频率最高真菌种

3．4 各大熊猫阴道真菌种分析

3．5 阴道真菌结合大熊猫生殖情况分析

第三章 发情期大熊猫阴道酵母菌的药敏分析

1 材料

1．1 试验菌种

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

2 方法

2．1 培养基

2．2 接种菌液的配制

2．3 药敏试验

3 结果

3．1 药敏试验图片

3．2 抑菌圈直径测量结果

4 讨论

结论

参考文献

致谢

附录