苦荞毛状根的诱导及高频再生体系的建立

摘要

苦荞是一种古老的一年生双子叶草本植物，它广泛分布于世界各地，具有适应性强、耐干旱、耐贫瘠、抗盐碱等特点。苦荞起源于我国，其具有极高的营养保健功能，同时兼具优秀的食疗作用以及卓越的药用价值，是许多绿色食品和重要功能性食品的生产原料。
　　本研究以园子荞、川荞1号和九江苦荞三种不同苦荞品种为试验材料，建立了一个高效的经由发根农杆菌诱导的苦荞毛状根培养体系。同时，深入探讨了影响毛状根诱导的诸多因素。试验发现，发根农杆菌A4对苦荞毛状根的诱导能力最好，园子荞较其他两种苦荞更易诱导苦荞毛状根的产生。经过两天的预培养，利用发根农杆菌A4菌液侵染园子荞下胚轴，其毛状根诱导效果最好，诱导率可达到83.6％。
　　本研究还以园子荞和九江苦荞两种不同苦荞品种为试验材料，利用不同外植体，不同培养基进行诱导培养，成功建立了经由体细胞胚胎途径的苦荞高频再生体系。结果表明:苦荞下胚轴的再生能力最好，园子荞的再生能力较强;最佳愈伤组织诱导培养基为MS培养基中添加2.0 mg/L2，4-D和1.0 mg/L KT，其诱导率可达98.94％;最佳芽分化培养基为MS培养基中添加1.0 mg/L KT和2.0 mg/L6-BA，其诱导率可达55.53％;最佳生根培养基为1/2MS培养基中添加1.0 mg/L IBA，其生根率高达86％。
　　同时，我们还以苦荞顶端分生组织为外植体，通过直接诱导丛生芽的产生，首次建立了经由组织器官途径的苦荞高频再生体系。其最佳丛生芽诱导培养基为MS培养基中添加2.0 mg/L6-BA和0.5 mg/L TDZ，最高芽分化率达69.05％，平均外植体出芽数最高可达18个。

目录

声明

摘要

缩写表

第一章 文献综述

1．1 荞麦的特征及价值

1．1．1 荞麦主栽品种及其特点

1．1．2 苦荞麦的植物学特征

1．1．3 苦养麦的生长及分布情况

1．1．4 苦荞麦的化学成分及其价值

1．2 苦荞毛状根的诱导

1．2．1 毛状根的特点

1．2．2 毛状根诱导的机理

1．2．3 毛状根的应用

1．2．4 毛状根研究的现存问题与发展前景

1．2．5 植物毛状根与植株再生

1．3 苦荞麦高频再生体系的建立

1．3．1 植物组织培养与再生技术

1．3．2 荞麦组培再生体系研究进展

1．3．3 荞麦遗传转化的研究进展

1．3．4 苦荞麦基因工程发展前景

1．4 研究的目的与意义

第二章 野生型发根农杆菌诱导苦荞麦毛状根的获得

2．1 材料与方法

2．1．1 试验材料

2．1．2 试验方法

2．2 结果

2．2．1 苦荞种子葫发与消毒条件探索

2．2．2 发根农杆菌诱导的苦荞麦毛状根的获得

2．2．3 苦荞毛状根诱导体系的优化

2．2．4 不同菌株对不同苦荞品种的发根能力的比较

2．2．5 不同苦荞外植体诱导形成毛状根能力的比较

2．2．6 苦荞毛状根的分子检测

2．2．7 植物激素对于苦荞毛状根生长的影响

2．2．8 土培法获得苦荞毛状根

2．3 讨论

2．3．1 苦荞基因型对发根农杆菌诱导毛状根的影晌

2．3．2 发根农杆菌菌株型对苦荞毛状根诱导的影响

2．3．3 不同苦荞外植体对毛状根诱导的影响

2．3．4 苦荞毛状根诱导条件的优化

2．3．5 植物激素对于苦荞毛状根生长的影响

2．3．6 土培法培养毛状根的优缺点

2．4 小结

第三章 苦荞麦高频再生体系的建立

3．1 材料与方法

3．1．1 试验材料

3．1．2 试验方法

3．2 结果

3．2．1 苦荞麦体细胞胚胎高频再生途径

3．2．2 苦荞麦组织器官再生体系

3．2．3 苦荞再生植株的生根培养

3．2．4 苦荞麦两种再生体系的比较

3．3 讨论

3．3．1 基因型与外植体对苦荞麦再生的影响

3．3．2 植物激素对体细胞胚胎再生途径的影响

3．3．3 植物激素对丛生芽再生途径的影响

3．3．4 苦荞麦不同再生体系的比较

3．4 小结

结论与创新

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间所获得的成果