香芪汤对内毒素血症小鼠凝血因子的影响

摘要

目前在兽医临床上，以大肠杆菌、沙门氏菌等革兰氏阴性杆菌为病原的家畜传染病占有相当大的比例。革兰氏阴性杆菌释放的内毒素可以进入血液循环，形成内毒素血症，进而诱发动物机体出现内毒素性休克、炎症反应综合征(systemic inflammatoryresponse syndrome，SIS)、弥漫性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation，DIC)等病理变化，可以影响家畜生长性能，进而影响家畜的经济价值。炎症反应与凝血/抗凝血反应息息相关，炎症可促发凝血反应;凝血反应可加重炎症反应;抗凝血反应也可拮抗炎症反应。香芪汤由香附（Rhizoma Cyperi）、黄芪（Astragalusmembranaceus）、穿心莲(Andrographis paniculata)以4∶3∶3为比例组成的中药复方。前期研究表明其能减少大肠杆菌病鸡血清中TNF-α、sEPCR的表达，显示该方剂具有抗炎和抗凝血的功效。本研究以内毒素血症小鼠为模型，进一步研究香芪汤及其单味中药香附、黄芪、穿心莲对内毒素血症小鼠凝血因子表达的影响。主要研究方法、结果如下:
　　1、建立内毒素血症小鼠模型:将无菌生理盐水按0.1ml/10g体重腹腔注射给空白组小鼠;将LPS(0.25mg/ml)、LPS(0.5mg/ml)、LPS(1.0mg/ml)按0.1ml/10g体重分别腹腔注射给低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠。发现各模型组小鼠在注射后1h均出现蜷缩、扎堆、闭目等现状，体温下降，眼周红、眼角湿润，粪便稀溏等症状。随着LPS浓度的增加，粪便不成形程度、皮毛松散程度增加，24 h后低剂量、中剂量小鼠恢复正常，36h后高剂量组小鼠恢复正常。各模型组小鼠IL-6、ICAM-1、VCAM-1的表达量升高，EPCR的表达量显著减少。LPS浓度越高，EPCR的表达量越少。通过比较IL-6、ICAM-1、VCAM-1、EPCR的表达，确定内毒素血症小鼠模型所需LPS溶液的浓度为0.5mg/ml。
　　2、香芪汤及其单味中药对内毒素血症小鼠精神状态的观察:将无菌蒸馏水按0.1ml/10g体重灌服给空白组、内毒素模型组，1次/d，连用7d。将香附(0.1g/ml)、黄芪(0.075g/ml)、穿心莲(0.075g/ml)、香芪汤(0.25g/ml)按0.1ml/10g体重分别灌服给香附组、黄芪组、穿心莲组、香芪汤组，1次/d，连用7d。将无菌蒸馏水按0.1ml/10g体重灌服给地塞米松组，连用4d，第5d，换用醋酸地塞米松溶液(0.2mg/ml)灌服，连用3d。第8d，按0.1ml/10g体重给空白组腹腔注射无菌生理盐水，其余各组按0.1ml/10g体重均注射0.5mg/ml LPS溶液。发现内毒素模型组小鼠在注射LPS1 h后出现蜷缩、扎堆、闭目等现状，体温下降，眼周红、湿润，粪便稀溏等情况，24h后恢复正常。用药各组小鼠在注射LPS溶液12h内出现蜷缩、扎堆，粪便湿润但有形等情况，12h后恢复正常。香附、黄芪、穿心莲及香芪汤能使内毒素血症小鼠体温在正常范围内。
　　3、香芪汤及其单味中药对内毒素血症小鼠凝血因子影响的研究:Western Blot法检测可知，内毒素血症小鼠sAPP、TF、sEPCR的表达量明显升高，tPA的表达量明显降低。用香附、黄芪、穿心莲及香芪汤进行干预，均能不同程度降低sAPP、TF、sEPCR的表达，不降低tPA的表达，起到保护血管内皮、保护PC抗凝途径、保护纤溶系统的作用。
　　4、香芪汤及其单味中药对内毒素血症小鼠作用机理的初探:Western Blot法检测可知，内毒素血症小鼠ADAM17、MAPKs、PKC delta的表达量显著升高。用香附、黄芪、穿心莲及香芪汤进行干预，均能不同程度降低ADAM17、MAPKs、PKC delta的表达。结果表明，香芪汤及其单味中药能减少血管上MAPKs、PKC delta的表达，使ADAM17的活化受到抑制，进而使EPCR的脱落减少，起到保护血管内皮、增强机体抗凝的作用。

目录

论文说明

声明

摘要

缩写词表

第一篇 选题背景与文献综述

第一章 选题背景

第二章 文献综述

1 内毒素血症的研究进展

2 凝血反应的研究进展

3 香芪汤及组成其单味中药的研究近况

第二篇 研究内容

第一章 内毒素血症模型的建立

1 材料与方法

2 试验结果

3 分析与讨论

第二章 香芪汤及其单味中药对内毒素血症小鼠凝血因子的影响

1 材料与方法

2 试验结果

3 分析与讨论

第三章 香芪汤及其单味中药对内毒素血症小鼠作用机理初探

1 材料与方法

2 试验结果

3 分析与讨论

第三篇 结论与创新性

参考文献

致谢

附图