PI3K/AKT/NF-kB信号通路对高原红细胞增多症大鼠骨髓组织中HIF-1α表达变化的调控作用研究

摘要

目的:通过复制大鼠高原红细胞增多症(HAPC)的病理模型，拟验证PI3K/AKT/NF-KB信号通路与高原红细胞增多症大鼠骨髓组织中HIF-1α表达变化的关联性，从而为系统地阐明HAPC发病及致病机理及防治研究提供实验理论依据。
　　方法:本试验选取20只检疫及适应期观察合格的健康雄性SPF级SD大鼠，体重为250±10g;随机分为两组，空白组和HAPC组（模型组），每组各10只。采用DS-F型高原性疾病环境模拟系统模拟海拔为3500m～6000m的高原环境，造模时间60d。造模结束后取全血作血常规检验;ELISA检测血清促红细胞生成素(EPO)含量;胸骨骨髓组织病理学观察;Western Blot检测大鼠骨髓组织P-AKT、NF-kB P65、HIF-1α蛋白表达;IHC检测大鼠骨髓组织P-AKT、NF-kB P65、HIF-1α蛋白表达;PT-PCR检测大鼠骨髓组织P-AKT、NF-kB P65、HIF-1αmRNA基因表达。
　　结果:1.血常规检验结果显示，HAPC组大鼠血红蛋白含量(HGB)含量范围在235～273g/L之间，均高于210g/L，提示造模成功;2.与空白组相比，HAPC组大鼠血清EPO含量明显升高，具有极显著性差异(P＜0.01)，提示:造模成功;3.大鼠骨髓组织病理学观察显示，与空白组相比，HAPC组骨小梁结构正常，但就100倍光镜观察下，骨髓腔内毛细血管数量及细胞数量明显增多，毛细血管内淤血，部分扩张明显，巨核细胞略微增多;400倍光镜观察下，骨髓腔内细胞排列密集，毛细血管内可见无核红细胞明显增多，红系细胞数量明显增多，粒系细胞比例相对减少，偶见少量粒系细胞进入血窦;4.WB检测结果显示，与空白组相比，HAPC组大鼠骨髓组织中P-AKT、NF-kB p65、HIF-1α等蛋白均极显著升高(P＜0.01);5.IHC检测结果显示，与空白组相比，HAPC组大鼠骨髓组织中P-AKT、NF-kB p65、HIF-1α等蛋白均极显著升高(P＜0.01);6.RT-PCR检测结果显示，与空白组相比，HAPC组大鼠骨髓组织中P-AKT mRNA、NF-kB p65mRNA等基因均显著升高(P＜0.05)，HIF-1αmRNA表达极显升高(P＜0.01)。
　　结论:1.高原红细胞增多症大鼠骨髓组织病理学特征表现为骨髓腔内细胞总数明显增多，红系细胞增生明显，骨髓腔内血窦扩张、淤血、血窦数量明显增多;2.高原红细胞增多症大鼠骨髓组织中P-AKT、NF-kB p65、HIF-1α等蛋白及P-AKT、NF-kBp65、HIF-1αmRNA等基因表达量明显升高;3.高原红细胞增多症大鼠骨髓组织中HIF-1α表达变化与骨髓组织中PI3K/AKT/NF-KB信号通路具有一定关联性。

目录

声明

摘要

英文缩写

第一章研究背景

1高原红细胞增多症(HAPC)研究进展

1．1 HAPC概述

1．2 HAPC发病特点

1．3 HAPC发病机制及原因

1．4 HAPC对关键脏器的病理改变

2 P13K/AKT和NF-KB信号通路研究进展

3本试验研究目的及意义

第二章研究方法

1试验材料

1．1试验动物

1．2主要试剂及耗材

1．3主要仪器

2试验方法

2．1技术路线

2．2动物分组及HAPC大鼠模型构建

2．3临床症状观察

2．4血液指标检测

2．5病理解剖观察

2．6骨髓组织病理学观察

2．7 Western Blot检测大鼠骨髓组织P-AKT、NF-KB P65、HIF-1α蛋白表达

2．8 IHC检测大鼠骨髓组织P-AKT、NF-kB P65、HIF-1α蛋白相对表达量

2．9 PT-PCR检测大鼠骨髓组织P-AKT、NF-kB P65、HIF-1α mRNA基因表达

第三章研究结果

1临床症状

2血常规检验结果

2．1血红蛋白(HGB)含量

2．2血常规检验结果

3血清EPO浓度

4病理解剖观察结果

5骨髓组织病理观察结果

6 Western Blot检测结果

6．2大鼠骨髓组织NF-KB p65蛋白表达情况

7 IHC检测结果

7．1大鼠骨髓组织P-AKT蛋白表达情况

7．2大鼠骨髓组织NF-KB p65蛋白表达情况

8 RT-PCR检测结果

8．1大鼠骨髓组织P-AKT mRNA表达情况

8．2大鼠骨髓组织NF-kB p65 mRNA表达情况

第四章讨论

第五章结论

参考文献

致谢