三种车前属植物总黄酮的提取、纯化及其抗氧化活性分析

摘要

车前草是车前科车前属中传统的中草药。中国主要开发用于药用的车前草有车前、平车前和大车前三种，并且在市场和临床应用中存在混用、共用现象。本研究以三种车前属植物全草为研究对象，比较三种车前草属植物中黄酮含量、抗氧化活性的差异，为促进车前属植物的全面开发和资源的有效利用积累资料，同时为车前属植物的黄酮类化合物的开发和工业生产提供一定的依据。主要结果如下:
　　1.采用乙醇浸提法提取车前草属总黄酮，以黄酮得率为考察结果，通过考察提取温度、提取时间、料液比和乙醇浓度等单因素的结果表明，乙醇浓度60％、液料比15mL/g、时间100min、温度50℃为车前草总黄酮提取的最佳条件。通过上述条件对三种车前草的总黄酮进行提取，得到车前总黄酮得率为3.41％，大车前黄酮得率为0.90％，平车前黄酮得率为0.30％。
　　2.超声提取车前草属黄酮的结果表明，液料比20mL/g、超声时间80min、超声功率210W是车前总黄酮超声提取的最佳提取工艺参数，车前、大车前和平车前的总黄酮得率分别为5.04％、2.86％和1.22％。与乙醇浸提相比，车前得率提高0.47倍;大车前得率提高2.18倍;平车前得率提高3.06倍。说明超声提取车前草总黄酮的效果优于乙醇浸提。
　　3.用大孔树脂纯化三种车前草属的粗制黄酮。通过实验确定了S-8型树脂的最佳工艺:pH值4，4.8mg/mL的上样浓度，用80％的乙醇以2.0mL/min洗脱，洗脱剂用量为120mL。车前草总黄酮纯化结果为:车前、大车前和平车前纯化后的浓度分别为41.81％、34.63％和27.06％。与纯化前相比，车前纯度提高16.03％;大车前纯度提高11.83％;平车前纯度提高5.01％。
　　4.车前草粗制黄酮和纯化黄酮的体外抗氧化结果表明，无论是纯化前还是纯化后，大车前总黄酮的还原力和对羟基自由基的清除作用最强，平车前最弱;车前总黄酮对DPPH自由基的清除作用最大，平车前最弱。由抑菌试验结果可知:纯化黄酮比粗制黄酮的抑菌效果好，三种车前草相比，车前的抑菌效果最好，平车前最弱。说明利用大孔树脂纯化车前草黄酮有一定效果，但随着分离纯化技术的发展，仍有需要探究更好的方法，提高其纯化率。
　　5.以六种常见黄酮标准品作对照，利用液相色谱分别对三种车前草属植物纯化黄酮进行检测，结果表明:车前草纯化黄酮中含有木樨草苷;大车前草纯化黄酮中含有木樨草苷、木樨草素、芹菜苷和芹菜素，其中木樨草素和芹菜苷、芹菜素含量较高;平车前纯化黄酮中含有木樨草苷、木樨草素和芹菜素，其中木樨草素和木樨草苷含量较高。

目录

声明

摘要

1文献综述

1．1车前草概述

1．1．1车前草的形态特征

1．1．2车前草的资源分布

1．1．3车前草的主要化学成分

1．1．4车前草的药理作用

1．2黄酮类化合物研究概述

1．2．1黄酮类化合物的理化性质

1．2．2黄酮类化合物的提取方法

1．2．3黄酮类化合物的分离纯化

1．2．4黄酮类化合物的药理作用

2立题依据

3材料、试剂及仪器

3．1材料

3．2供试菌种

3．3仪器设备

3．4 试剂

4研究方法

4．1乙醇浸提车前草黄酮的工艺研究

4．1．1样品前处理

4．1．2总黄酮含量的测定

4．1．3车前草黄酮的乙醇浸提法单因素实验

4．1．4响应面试验设计

4．2超声辅助提取车前草黄酮的工艺研究

4．2．1总黄酮含量的测定

4．2．2单因素实验

4．2．3响应面试验

4．3车前草黄酮的纯化工艺研究

4．3．1车前草粗制黄酮的制备

4．3．2树脂类型筛选

4．3．3黄酮吸附-解吸单因素试验

4．3．4动态吸附-解吸考察及纯化黄酮的制备

4．4车前草黄酮类化合物抗氧化抑菌活性评价

4．4．1 DPPH自由基清除能力的测定

4．4．2羟基自由基清除能力的测定

4．4．3 Fe3+还原力的测定

4．4．4车前草黄酮的抑菌活性

4．5车前草黄酮纯化前后的高效液相色谱图

5结果与分析

5．1乙醇浸提车前草总黄酮的工艺研究

5．1．1总黄酮含量的测定的标准曲线

5．1．2乙醇浸提车前草黄酮单因素实验结果

5．1．3响应面法优化与分析

5．2超声辅助提取车前草总黄酮的工艺研究

5．2．1单因素对黄酮类化合物得率的影响

5．2．2响应面法优化与分析

5．3车前草黄酮的纯化工艺研究

5．3．1大孔树脂吸附试验结果

5．3．2 S-8树脂的静态吸附试验

5．3．3 S-8树脂的动态吸附试验

5．4车前草黄酮类化合物抗氧化抑菌活性评价

5．4．1车前草黄酮纯化前后对DPPH自由基的清除作用

5．4．2车前草黄酮纯化前后对羟基自由基的清除作用

5．4．3车前草黄酮纯化前后还原力

5．4．4车前草黄酮的抑菌活性

5．5车前草黄酮纯化前后的高效液相色谱图

6讨论

6．1车前草黄酮的提取与纯化

6．2车前草黄酮的抗氧化、抑菌活性分析

6．3车前草黄酮组分的分离与比较

7结论

参考文献

致谢

作者简历