重组腺病毒载体介导的VEGF基因增强大鼠TRAM皮瓣存活的实验研究

摘要

该实验研究采用将Ad-VEGF<,165>导入大鼠TRAM皮瓣皮下和/或腹直肌的方法及导入后的VEGF<,165>基因在mRNA水平增强表达的策略.实验中,采用复制缺陷型重组腺病毒载体介导的VEGF<,165>基因感染原代培养成肌细胞和大鼠TRAM皮瓣组织的方法,分别从体外和体内实验两个方面研究Ad-VEGF<,165>感染对靶细胞或/和组织生物学特征和血管生成的影响,观察其增强TRAM皮瓣存活的潜力,探讨Ad-VEGF<,165>感染在促进带蒂肌皮瓣存活中的治疗意义,为进一步开展复制缺陷型重组腺病毒作为基因载体在促进皮瓣存活中的应用,提供实验依据.该实验研究结论如下:1.Ad-VEGF<,165>和Ad-GFP在QBI-293A细胞中扩增,可获得高滴度的病毒颗粒,滴度通常大于1×10<'8>pfu/ml.2.体外研究证明:60MOI时,重组腺病毒感染成肌细胞后,并不影响其生物学特性,成肌细胞可作为外源性VEGF<,165>基因的表达平台.3.体内研究证实:Ad-VEGF<,165>感染SD大鼠TRAM皮瓣组织后,能显著增加其VEGF<,165>蛋白表达水平,促进血管生成,增加TRAM皮瓣存活面积.该课题为进一步研究使用Ad-VEGF<,165>感染TRAM皮瓣和/或其它肌皮瓣,增强其存活创造了良好的基础,也为用重组腺病毒作为载体的基因治疗在整形重建外科中的应用,提供了值得借鉴的方法.

目录

英文缩略语

前言

第一部分重组腺病毒的扩增和滴度测定

材料与方法

结果

讨论

结论

第二部分重组腺病毒感染骨骼肌成肌细胞的体外实验研究

材料与方法

结果

讨论

结论

第三部分重组腺病毒感染大鼠TRAM皮瓣的体内实验研究

材料与方法

结果

讨论

结论

全文总结

致谢

参考文献

参考文献

附录A 主要参考书目

附录B 发表文章

附录C 科技查新报告

附图

第一、二部分实验照片

第三部分实验照片