出生缺陷家系收集及并指（趾）多指（趾）畸形的HOXD13基因突变分析

摘要

第一部分,出生缺陷家系收集-建立基于出生缺陷监测的家系收集网络和DNA标本库.全国出生缺陷监测网、5岁以下儿童死亡监测、孕产妇死亡监测(合称妇幼卫生监测)运作近20年,组织结构稳定、业务人员具有较高专业素质,并且得到国家卫生行政部门的支持.以此为基础来建立综合性的出生缺陷家系收集网络.具体措施为:改进现有的出生缺陷医院监测,通过业务培训、质量监控措施,建立全国性的家系线索收集网络,重点收集核心家系资料和生物标本;建立人群出生缺陷监测和家系试点,按case-parent trio设计收集所有出生缺陷患儿及其父母的临床资料和血液标本;建立临床筛查、病残儿鉴定、自愿者报告等辅助家系收集途径;标准化生物标本采集和DNA库实验室技术;设计计算机软件系统规范家系资料及DNA标本管理;并探讨了家系收集网络及DNA标本库的应用方向和发展前景.第二部分,SPD畸形的HOXD13基因突变分析.该部分为利用家系标本进行的应用研究之一.现场家系调查获得SPD家族成员的临床资料和静脉血液标本.先证者及其母亲血液标本常规染色体核型分析,未发现染色体畸变.分析家系患者临床特征及遗传方式,结合文献资料确定突变检测的候选基因为HOXD13.优化PCR方法后,采用侧翼引物扩增HOXD13突变热点序列,经电泳检测PCR产物发现SPD患者存在HOXD13基因突变.继续检测HOXD13基因外显子是否存在其他位点的突变.先对PCR方法进行优化;2﹪琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,5﹪中性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离突变片段,回收并纯化产物后直接测序,经拼接获得外显子全长序列;经与Genebank的HOXD13序列和家系中非患者序列比较,确证SPD由HOXD13的插入突变所致.该家系患者HOXD13基因额外插入了8个丙氨酸编码序列,插入片段为正常基因中编码5-12丙氨酸残基的序列,此类型突变被称为聚丙酰胺扩展(Polyalanine expansion).未发现HOXD13编码区存在其他突变.这是首例报道的由HOXD13基因突变引起的华人SPD,突变位点在国内外未见报道.最后,我们分析了HOX基因突变与SPD的关系,可能的致畸机理;结合文献探讨了HOX基因在肢体发育中的作用,HOX基因突变与人类肢体畸形的关系和进一步的研究方向.

目录

摘要

ABSTRACT

引言

第一部分出生缺陷家系收集—建立基于出生缺陷监测的家系收集网络和DNA库

1前言

2材料与方法

2.1范围和对象

2.2出生缺陷病例纳入标准

2.3出生缺陷家系纳入标准

2.4资料类型

2.5资料收集工具

2.6生物标本采集工具

2.7组织机构及其相应职责

2.8出生缺陷家系收集网络的建立方法

2.9家系线索收集及调查方法

2.10生物标本采集方法

2.11生物标本的保存

2.12质量管理

2.13资料运转

2.14严格遵循医学伦理原则

2.15项目的时间安排

3结果

3.1全国范围家系收集网络

3.2通过收集网络获得的出生缺陷核心家系

3.3成都地区试点家系收集网络

3.4成都地区收集到的出生缺陷家系

3.5具有较高研究价值的核心家系

3.6核心家系的线索来源

4讨论

5小结

第二部分并指(趾)多指(趾)畸形的HOXD13基因突变分析

引言

§1 HOXD13基因及其突变热点区域的PCR扩增方法

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5小结

§2并指(趾)多指(趾)畸形的HOXD13基因突变分析

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5小结

结束语

参考文献

附Ⅰ我国出生缺陷监测进展(综述1)

附Ⅱ人类肢体畸形与HOX基因突变(综述2)

附Ⅲ主要参考书目

附Ⅳ主要英文单词及缩写

致谢