成都地区部分人群军团菌抗体调查及LpHSP60基因克隆与表达

摘要

本研究分两部分，第一部分：对成都地区部分健康人群和肺科病人血清进行军团菌抗体检查，以了解成都地区不同人群军团菌感染情况。第二部分：研究嗜肺军团菌HSP60抗原基因的克隆与表达，为军团菌病核酸疫苗的研究奠定基础。 一、成都地区部分人群血清军团菌抗体检查 采用微量凝集试验对393份健康人及肺科住院病人血清标本进行Lp1-8型及Lm型军团菌抗体效价测定，以了解成都地区不同人群军团菌感染情况。结果表明所测军团菌各型均有阳性出现。健康人群军团菌抗体阳性率为31.60％(73/231)，肺科住院病人为35.80％(58/162)，两者无显著性差异(P＞0.05)。健康人Lp1型阳性率最高(17.31％)，其次为Lp6型(11.26％)，Lp8型最低(0.43％)。肺科患者中Lp1阳性率最高(12.35％)，其次为Lp6(5.56％)。肺科病人感染的主要菌型与健康人一致，也是以Lp1、6为主要型别。这说明成都地区普遍存在不同种型的军团菌感染。本研究首次报道了成都地区Lm的感染情况。 二、嗜肺军团菌HSP60抗原基因的克隆与表达 以嗜肺军团菌Lp1株基因组DNA为模板，通过PCR扩增获得了嗜肺军团菌的HSP60基因。将HSP60基因定向克隆入原核表达载体pUC18，构建原核表达重组质粒pUC18-HSP60，测序表明片段大小为1647bp，与GeneBank中嗜肺军团菌HSP60基因的核苷酸序列一致性为98％，根据核酸序列推导的548个氨基酸序列，与GeneBank中嗜肺军团菌HSP60蛋白的一致性为99％。IPTG诱导重组质粒pUC18-HSP60在原核系统中表达出60kD的蛋白。将重组质粒pUC18-HSP60中的目的基因亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-HSP60并转染NIH3T3细胞，通过免疫荧光检测HSP60基因在真核细胞中的表达。结果显示转染了重组质粒的NIH3T3细胞，其免疫荧光检测呈阳性反应，证实重组质粒pcDNA3.1-HSP60能在NIH3T3中有效表达HSP60蛋白。目前该研究未见国内报道。本研究为我国军团菌病核酸疫苗的进一步研究奠定了基础。

目录

第一部分成都地区部分人群血清军团菌抗体水平调查

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分嗜肺军团菌HSP60基因的克隆与表达

前言

一嗜肺军团菌HSP60基因原核表达质粒的构建与表达

引言

材料和方法

结果

讨论

小结

二嗜肺军团菌HSP60基因真核表达质粒的构建及其在真核细胞中的表达

引言

材料与方法

结果

讨论

小结

全文总结

参考文献

综述国内外军团菌病流行现状及防治研究

致谢

个人简历

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