应用血清蛋白质组学技术筛选和鉴定舌癌肿瘤抗原

摘要

目的：探索应用血清蛋白质组学技术分离和鉴定头颈部肿瘤标志物，寻找舌癌早期诊断、病程监测以及预后判断的血清学指标。建立血清蛋白质组学技术平台，为今后的研究奠定基础。 方法：通过裸鼠皮下多点接种人舌癌细胞(Tca8113)，建立移植瘤动物模型。在成瘤后收集血清，对血清样品进行预处理，去除高丰度的白蛋白。采用双向聚丙烯酰氨凝胶电泳分离血清中的蛋白，通过考马斯亮蓝染色和硝酸银染色，对比实验组与差异组的血清蛋白谱。利用PD-Quest分析软件寻找差异表达的蛋白，通过基质辅助激光解吸飞行时间质谱鉴定目的蛋白。收集临床舌癌患者的血清和手术标本，利用RT-PCR、WesternBlotting以及免疫组化染色技术，验证目的蛋白在mRNA以及蛋白质水平上的差异表达。 结果：通过双向凝胶电泳，分离和鉴定了5个差异表达的蛋白。其中鳞状细胞癌抗原-1与舌癌密切相关。通过RT-PCR、WesternBlotting以及免疫组化染色技术，发现鳞状细胞癌抗原-1的mRNA在舌癌组织中高表达，免疫组化染色也发现在舌癌组织中鳞状细胞癌抗原-1染色呈强阳性。通过WesternBlotting分析，也发现鳞状细胞癌抗原-1在舌癌患者血清中高表达。 结论：鳞状细胞癌抗原-1与舌癌密切相关，血清中鳞状细胞癌抗原-1的表达水平可以作为舌癌早期诊断的独立指标以及作为可能存在的治疗靶点。血清蛋白质组学技术可以有效、快速的分离和鉴定肿瘤相关蛋白，为肿瘤研究开辟了新的思路和方法。

目录

前言

材料和方法

一、裸鼠移植瘤模型的建立

二、血清标本预处理

三、双向聚丙烯酰氨凝胶电泳

四、扫描成像

五、差异蛋白质点的切取

六、蛋白质斑点的质谱鉴定

七、数据库检索鉴定蛋白质

八、RT-PCR

九、Western Blotting analysis

十、免疫组化染色

结果

讨论

参考文献

结论

文献回顾 蛋白质组学和双向电泳简介

1.蛋白质组学研究的提出

2.蛋白质组学研究内容

3.蛋白质组学研究常用的方法和技术

4.其他研究方法

5.结论与展望

致谢

个人简历