巯基受损在内皮细胞NO系统功能障碍中的作用及其机制初探

摘要

目的：通过巯基螯合剂DEM对内皮细胞二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）活性的影响，探讨氧化应激导致NO通路功能障碍的可能机制及其在动脉粥样硬化发病中的作用。 方法：在培养的内皮细胞中加入不同剂量DEM、作用不同时间，以确定能明显降低细胞内GSH含量但却不明显影响细胞存活率的最适DEM作用浓度和作用时间。以该剂量DEM预处理内皮细胞30分钟后去除DEM，换成无血清培养基继续培养0、0.5、2、6、12、24小时后，检测各时间段的细胞内GSH含量、DDAH活性及上清液中NO含量。实验按照6个不同的检测点分成6大组，分别为0、0.5、2、6、12、24小时组。分别设对照组与加药组。细胞存活率检测用MTT法；细胞内GSH含量用荧光测定法；细胞内DDAH活性用分光光度法检测与ADMA反应后生成的L-瓜氨酸的生成量来表示；上清液中NO含量用NO试剂盒检测。 结果：MTT结果显示DEM最佳的作用浓度为0.6μmol／L，作用时间为30分钟，该浓度DEM处理内皮细胞30分钟后，GSH含量已明显降低，但内皮细胞生存率仅比对照组轻微下降，未明显影响细胞存活率；GSH浓度的检测显示，经DEM预处理后半小时细胞内GSH含量已较对照组明显降低（降低28.7％，p＜0.05），随后逐步回升，12小时反超正常水平，随后回落，至24小时时恢复至正常水平；DDAH活性的检测显示，经DEM预处理后DDAH活性随之降低，至2小时时达最低值（降低80.07％，p＜0.01），以后DDAH活性逐渐恢复，24小时后亦出现反超，呈类似于GSH变的趋势，但时间略滞后；培养液中NO含量在DEM预处理后持续下降，同样于2小时时达最低水平，随后逐步回升，变化趋势与DDAH基本相似。相关性分析显示DDAH和NO的变化显著正相关（r=0.651，p<0.01），上述三者相似的变化规律强烈提示，DDAH酶活性中心-SH受损可能是氧化应激引发的内皮细胞NO通路功能障碍的重要机制。 结论：DDAH巯基的损伤可能是NO系统功能障碍的重要机制之一，氧化应激造成内皮功能障碍、并进而致动脉粥样硬化可能与此密切相关。提示保护DDAH的巯基、修复巯基损伤应是对抗各种PNO通路损伤因素、包括氧化应激损伤的重要途经之一。

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参考文献

文献综述：NO通路与动脉粥样硬化

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