TRAIL和化疗药物协同诱导非小细胞肺癌凋亡的实验研究

摘要

目的:目前，抗肿瘤化疗药物的毒副作用，已成为其临床应用以及提高疗效的主要障碍，寻找作用位点与现有化疗药物不同且特异性高、毒副作用小的抗肿瘤治疗药物成为肿瘤基础和临床研究的热点。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)又称凋亡素2-配体(Apo-2L)，是TNF家族的新成员，以其对肿瘤细胞杀伤的高度特异性，而对正常细胞无明显毒性，而备受瞩目。本研究旨在观察TRAIL对人NSCLC细胞的体外生长抑制及诱导凋亡作用；以及与亚毒性剂量的DDP联合应用是否具有协同抗肿瘤作用，并初步探讨其作用机制。 方法:采用SRB染色法测定TRAIL、DDP单药以及联合应用对NSCLC细胞NCI-H460和A549的生长抑制作用，并绘制生长抑制曲线，计算半数抑制浓度(IC<,50>)；Hoechst33342染色荧光显微镜观察TRAIL、DDP单药及联合作用后，细胞凋亡的形态学变化；Annexin V-FITC/PI双染色，流式细胞技术(FCM)检测TRAIL、DDP单药及联用对细胞凋亡率的影响；RT-PCR技术检测药物作用前后NCI-H460和A549细胞TRAIL膜受体DR4、DR5、DcR1、DcR2基因表达水平情况；Western blot分析药物作用前后，NCI-H460细胞的Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2和Bax蛋白表达水平的改变。 结果: 1．SRB结果显示TRAIL在体外对人大细胞肺癌NCI-H460及肺腺癌A549细胞有明显的生长抑制作用，并具有明显剂量依赖性，NCI-H460对TRAIL的作用较为敏感，而A549细胞相对耐药，IC<,50>值分别为6.119ng/ml和82.822μg/ml。DDP对NCI-H460、A549细胞均有明显的细胞毒作用及剂量依赖性，IC<,50>值接近，分别为0.407μg/ml和0.519μg/ml。亚毒性剂量的DDP与TRAIL联合应用对NCI-H460及A549细胞具有协同抑制作用。 2．流式细胞术显示，亚毒性剂量的DDP与TRAIL联用能显著增加NCI-H460和A549的细胞凋亡。Hoechst33342荧光染色观察到细胞皱缩、核碎裂、新月形核等典型的细胞凋亡特征性变化。 3．RT-PCR结果示，NCI-H460和A549细胞经过TRAIL或/和DDP作用48h后，DR4和DR5的表达水平未发生明显变化；NCI-H460细胞诱骗受体DcR2的表达略为下调；诱骗受体DcR1未能检测出。 4．Western blot结果表明，亚毒性剂量的DDP和TRAIL协同作用NCI-H460细胞48h后，Caspase-8和Caspase-9蛋白表达明显增强；Bel-2的表达无明显变化；Bax的表达略为增强。 结论: 1．TRAIL可通过诱导凋亡的方式有效的抑制人大细胞肺癌NCI-H460及肺腺癌A549细胞的增殖。 2．亚毒性剂量的DDP与TRAIL对NCI-H460和A549细胞有协同抗肿瘤的作用，并协同增强NCI-H460和．A549的细胞凋亡。 3．亚毒性剂量的DDP与TRAIL的协同抗肿瘤作用，与死亡受体DR4、DR5的基因表达水平无关，可能与诱骗受体DeR2表达下调有关。 4．亚毒性剂量DDP和TRAIL的协同杀伤作用，可能与其上调促凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9和Bax表达有关。

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综述 TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡机制与临床

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