昆明小鼠胰腺导管上皮样细胞向胰岛素分泌细胞的诱导分化

摘要

目的：通过观察原代昆明小鼠胰腺导管上皮样细胞在动态培养条件下的分化状态以及该分化后的细胞分泌胰岛素的功能，探讨正常昆明小鼠胰腺导管上皮样细胞向胰岛素分泌细胞分化的诱导条件、诱导后的胰岛素分泌细胞分泌胰岛素的功能以及分泌的胰岛素的降糖活性，为1型糖尿病的细胞替代治疗提供实验依据。 方法：取正常成年昆明小鼠胰腺导管上皮进行原代培养，利用细胞贴壁时间的差异在培养24 h、48 h、72 h连续换液除去腺体细胞，在含2％胎牛血清的培养条件下除去成纤维细胞，使可以在无血清培养基中生长的胰腺导管上皮样细胞形成优势生长。在此条件下培养、传代并鉴定。取第三代细胞以无血清诱导培养基促使其分化。取诱导后3 d、5 d、7 d、14 d的细胞进行免疫细胞化学染色鉴定。ELISA检测诱导生成的胰岛素分泌细胞在高糖刺激下分泌胰岛素的功能。用高糖培养基刺激诱导生成的胰岛素分泌细胞后离心取上清液注射到正常昆明小鼠腹部皮下，检测所分泌的胰岛素的降糖活性。 结果：经过无血清诱导培养基诱导7 d后，胰腺导管上皮样细胞开始向胰岛素分泌细胞分化，胰岛素抗体染色阳性。14 d胰岛素抗体染色阳性细胞明显增多。该细胞在高糖刺激下可以分泌胰岛素。所分泌的胰岛素可以使正常昆明小鼠的血糖下降。 结论：昆明小鼠胰腺导管上皮样细胞经过无血清培养基诱导可以向胰岛素分泌细胞方向分化。并且该胰岛素分泌细胞在高糖刺激下具有分泌胰岛素的功能。所分泌的胰岛素具有降糖活性。

目录

声明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 Development of the Pancreas and Islet Transplantation for Type 1 Diabetes Mellitus

附录

致谢