慢性乙型肝炎患者唾液中HBV DNA定量检测研究

摘要

乙型肝炎是世界性分布的传染病，我国是乙肝的高发区之一。乙型肝炎传播的主要危险因素有血液及其制品、静脉用药、污染针头注射、性传播及母婴垂直传播等。但尚有相当部分的HBV感染者无明显危险因素暴露史，说明可能存在其他传播途径。据报道HBV携带者的唾液可能具有潜在的传染性。国内外有对乙肝患者唾液进行血清学标志物和HBVDNA检测的相关报道，在乙肝患者的唾液里检测出了HBsAg，HBeAg，HBVDNA，但相关报道的例数较少，其临床意义尚无结论。病毒DNA是乙型肝炎病毒(HBV)复制和传染的重要标志。本实验的目的是建立定量检测慢性乙型肝炎患者唾液中HBVDNA的方法，并对60慢性乙型肝炎患者唾液中的HBVDNA含量进行检测，研究HBVDNA在唾液中的分布状况及含量，以及与血清HBVDNA之间的关系，观察不同口腔卫生指标对唾液HBVDNA状况的影响，探讨唾液在该病传播流行中的意义。 材料和方法：检测对象为我院2005年慢性乙型肝炎住院患者60例，均未接受过抗病毒治疗。我们对检测对象进行了口腔检查包括：菌斑指数(PI)、牙龈指数(GI)、探针深度(PD)。检测对象均无口腔粘膜病和口腔粘膜破损。唾液和血液均为同时收集，即刻检验。唾液的取样：自然留取清亮唾液1ml，取500ul定量检测，采用Trizol方法裂解唾液中DNA，氯仿-异丙醇方法进行分离和提取，并对唾液进行了隐血检测。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV血清学标志物，用荧光定量聚合酶反应PCR法检测HBVDNA，对慢性HBV感染者唾液和血液标本进行检测分析。 结果：1、60例慢性HBV感染者中唾液HBVDNA阳性34例，阳性率为56.7％，阳性者平均HBVDNA含量为4.16±0.57(拷贝数/m1的对数)；血液中HBVDNA阳性54例，阳性率为90％，阳性者平均HBVDNA含量为6.19±1.17(拷贝数/m1的对数)。60例慢性HBV感染者的唾液HBVDNA阳性率和含量均显著低于血液(x2=17.045，p=0.000＜0.05；t=9.399，p=0.000＜0.05)。54例血液HBVDNA阳性者中唾液HBVDNA阳性例数为34例，阳性率为63％，血液HBVDNA阴性患者中唾液HBVDNA全部阴性。34例唾液HBVDNA和血液中HBVDNA同时阳性者，唾液和血液平均HBVDNA含量分别是4.16±0.57(拷贝数/ml的对数)和6.24±1.11(拷贝数/m1的对数)，前者显著低于后者(t=9.65，p=0.000＜0.05)。同时唾液HBVDNA含量和血液HBVDNA含量不相关(r=0.047，p=0.793＞0.05)。 2、在35例血清学检查大三阳(HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性)患者中，血清HBVDNA全部阳性(100％)，阳性者平均HBVDNA含量为6.48±1.05(拷贝数/ml的对数)；唾液HBVDNA阳性22例(62.9％)，平均HBVDNA含量为4.22±0.64(拷贝数/ml的对数)。17例血清学检查小三阳(HBsAg、抗-HBeAg、抗-HBc阳性)患者中，血清HBVDNA阳性12例(70.6％)，平均HBVDNA含量为6.01±1.24(拷贝数/ml的对数)；唾液HBVDNA阳性9例(52.9％)，阳性者平均HBVDNA含量为4.16±0.45(拷贝数/ml的对数)。8例血清学检查二阳(HBsAg、抗-HBc阳性)患者中，血清HBVDNA阳性7例(87.5％)，平均HBVDNA含量为5.01±1.04(拷贝数/ml的对数)；唾液HBVDNA阳性3例(37.5％)，阳性者平均HBVDNA含量为4.06±0.71(拷贝数/ml的对数)。血清(x2=11.062p＜0.05)；唾液(x2=1.725p＞0.05)。 3、口腔PI，GI，PD指数对唾液HBVDNA的阳性率和含量没有影响。唾液隐血检测结果显示，对唾液中无出血的乙肝患者，其唾液中的HBVDNA浓度与有明显出血的患者水平相近。 结论：(1)、半数以上的乙型肝炎患者唾液中可检出HBVDNA，其平均含量达到4.16±0.57(病毒拷贝数的对数值)，唾液传播可能在HBV的流行中具有重要意义。 (2)、血清中HBVDNA的含量与HBVDNA在唾液中的检出率无明显关联，与唾液中HBVDNA的含量也没有明显关联。 (3)、乙肝患者的口腔卫生状况与唾液中的HBVDNA检出率和含量无明显关联。 (4)、唾液中HBVDNA的来源可能存在血液来源以外的其它途径。

目录

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摘要

前言

实验材料

实验方法

结果

一、60例乙肝患者的口腔卫生指标，血清学及HBVDNA的检测结果总结为表达

二、唾液中HBVDNA检出的灵敏度

三、唾液HBVDNA检验结果与血液HBVDNA检验结果比较

四、血清乙肝五项检测（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBe、抗-HBc)与血液、唾液HBV DNAS相关性

五、菌斑指数（PI与唾液HBV DNA 阳性率、含量的关系）

六、牙龈指数（GI）分数一与唾液HBV DNA的关系

七、上颌中切牙、下颌第一磨牙探诊深度与唾液HBVDNA阳性率的关系

八、唾液的隐血指标与唾液HBV DNA 阳性率的关系

讨论

一、唾液HBV DNA与血液HBV DNA的关系

二、血清乙肝五项检测(HBsAg、-HBs HBeAg、抗- HBe、HBeAg、抗- HBc )结果与血液、唾液HBV DNA的关系

三、患者口腔状况与唾液中HBVDNA的关系

四、唾液的隐血测试与唾液HBVDNA之间的关系

参考文献

参考文献

致谢