损伤血瘀证微观细胞凋亡、免疫机制和中医宏观思维诊断的比较研究

摘要

目的：
　　本课题拟从细胞调亡、免疫细胞因子角度对损伤血瘀证进行研究，为今后临床上从骨骼肌细胞调亡角度、免疫角度有效诊断损伤血瘀证不同病理周期及合理把握用药时期提供实验室依据。通过本论文的探索及研究，不仅能为损伤血瘀证的证候客观化作出重要的贡献，更加能补充说明中医证候学的科学内涵，即宏观与微观的统一，局部与整体的统一，静态与动态的统一。
　　方法：
　　SD大鼠80只，按随机原则分为8组，即空白对照组、造模后2h组、造模后8h组、造模后24h组、造模后2d组、造模后3d组、造模后5d组和造模后7d组，每组10只。造模方法采用成熟的定量重力打击法，空白对照组在造模前，其余组分别在相应的时象点处死大鼠，并分离其骨骼肌细胞和血液，测试骨骼肌细胞凋亡情况、病理切片及血液的免疫细胞因子指标IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α，动态观察损伤后骨骼肌细胞凋亡、组织病理状态、全身免疫变化情况，通过损伤血瘀证早期的各种客观化的实验数据，判断损伤血瘀证早期的证本质。同时结合中医诊断理论,通过对中西医的系统比较,探索中医诊断学宏观与微观，局部与整体，静态与动态相统一的理论基础。
　　结果：
　　1.AP-TUNNEL法测试推算出损伤早期（1周以内）凋亡水平的基本规律。
　　2.流式细胞仪测caspase-3染色率与细胞凋亡水平具有高度的相关性。
　　3.细胞因子测定IL-2的变化趋势明确，形成一个先扬后抑的曲线；IL-4在损伤后平稳上升，24H后形成快速上升趋势，在72H形成一个高点，逐步回落，并显著低于伤后48小时的水平；IL-6的在损伤血瘀证模型成功之后持续上升，在72H形成一个高点，逐步回落至损伤后48H的水平；IL-8的在损伤血瘀证模型成功之后持续上升，在72H形成一个高点，在伤后第168小时，即第7天形成回落至损伤后48H的水平；IL-10的在损伤血瘀证模型成功之后持续上升，在72H形成一个高点，在伤后第168小时，即第7天形成回落至损伤后48H的水平；TNF-α的在损伤血瘀证模型成功之后持续上升，在48H形成一个高点，在伤后第72小时，回落至后损伤后24H的水平，并且持续下降。
　　4.HE染色观察骨骼肌组织病理变化情况，可以初步判断损伤血瘀证早期（1周）的病理分期：
　　①出血期：0-24小时;
　　②炎性期：24-72小时;
　　③炎性及肉芽修复期：72-168小时。
　　结论：
　　1.定量打击法造成的损伤血瘀证导致和加速细胞凋亡。
　　2.通过检测阳性率较高的凋亡调节蛋白酶caspase-3与凋亡有着必然的联系。
　　3.通过观察细胞因子IL-2，IL-4，IL-6，IL-8，IL-10，TNF-α，发现损伤血瘀证凋亡变化趋势与机体免疫细胞因子之间存在着双向动态平衡的偶联关系。
　　4.通过镜下HE染色，进一步证实出血、免疫反应、凋亡、修复之间具有确切的周期性联动关系。
　　5.从临床意义分析，伤科一周左右的水肿是可能免疫系统性反应降低导致的细胞凋亡产生的。
　　6.宏观与微观相结合，局部与整体相结合，静态与动态相结合是揭示损伤血瘀证证本质，促进中医诊断学加速发展的理想之路。

目录

封面

前言

中文摘要

英文摘要

目录

1.引言

2. 研究内容与方法

2.1.实验动物

2.2.实验材料

2.3.实验方法

2.4.检测指标

3.结果

3.1.AP-TUNNEL法测试原位细胞死亡百分率

3.2.流式细胞仪测定caspase-3染色率

3.3.细胞因子测定情况分析

3.4.HE染色观察骨骼肌组织病理变化情况

3.5.结果的总体分析

3.6.实验结果

4.实验讨论

4.1损伤血瘀证的微观证本质

4.2.损伤血瘀证凋亡相关问题的讨论

4.3.损伤血瘀证免疫相关问题的探讨

4.4.损伤血瘀证临床问题的讨论

5.中医诊断宏观理论与西医微观指标的比较研究

5.1.损伤血瘀证宏观理论与西医微观指标的比较研究

5.2.宏观与微观相结合的损伤血瘀证研究对于内科血瘀证研究提供的重要启示

5.3.中医学宏观理论和西医微观指标比较研究的体会和展望

6.结论

致谢

参考文献