截瘫三联针对SD大鼠脊髓损伤神经功能保护及行为学的影响

摘要

目的：观察截瘫三联针治疗SD大鼠脊髓损伤的有效性，探讨其可能的作用机制，为临床脊髓损伤的治疗提供实验依据。
　　方法：采用改良钳夹法建立大鼠急性脊髓损伤模型，将75只脊髓损伤大鼠随机分为5组，每组15只。A组：治疗组（截瘫三联针+甲基强的松龙），B组：对照组（常规针刺+甲基强的松龙），C组：基础治疗组（甲基强的松龙）， D组：模型组，E组：假手术组。甲基强的松龙治疗，于脊髓损伤术后即刻行甲基强的松龙腹腔注射；电针治疗，A、B两组分别于脊髓损伤术后4h行相应腧穴电针治疗，模型组与假手术组不做任何治疗。各组大鼠分别于1、3、7天行行为学运动功能BBB评分观察大鼠神经功能变化后，取损伤段脊髓组织行伊红-苏木素（HE）染色观察脊髓组织结构变化，并通过免疫组织化学方法（IHC）观察各组大鼠急性脊髓损伤后降钙素基因相关肽（CGRP）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）阳性细胞的表达情况。
　　结果:1.行为学结果显示：①与E组比较，A、B、C、D组大鼠1、3、7天BBB评分均明显降低（P＜0.05）；②治疗1d后，A、B、C、D各组大鼠后肢 BBB评分未见明显差异（P＞0.05）；③治疗3d后，A、B、C各组评分均高于D组（P＜0.05），A、B、C各组比较未见明显差异（P＞0.05）；④治疗7 d后， A、B组评分均高于C、D组（P＜0.05），A、B两组比较未见明显差异（P＞0.05），C组评分高于D组（P＜0.05）；⑤A、B、C、D各组1 d、3d、7d组内比较， BBB评分均有不同程度的恢复，差异均具有统计学意义（P﹤0.05）；⑥E组各个时间点比较差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　2. HE染色结果显示：各治疗组及模型组脊髓内均可见不同程度的出血灶、炎性细胞浸润，坏死、空洞形成，亦可见残存神经元胞体变圆、胞核固缩、边置、消失，且白质与灰质界限不清；与模型组相比，A、B、C各组脊髓组织病理学改变明显减轻；假手术组各个时间点神经元结构形态规则，白质致密，无明显出血、水肿、坏死、炎细胞浸润等变化。
　　3.免疫组化结果显示：①CGRP：A、B、C、D、E各组均可见阳性细胞表达，1 d、3 d与 E组比较，脊髓损伤各组阳性细胞表达量明显低于 E组（P＜0.05）；治疗7d后， A、B两组阳性细胞表达与 E组比较未见明显差异（P＞0.05），C、D两组阳性细胞表达明显低于 E组（P＜0.05）；A、B两组各个时间点阳性细胞表达量明显高于 C、D两组（P＜0.05）；A组与B组比较和C组与D组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；A组1d与3d、1d与7d、3d与7d组内比较，B、C、D三组1d与7d、3d与7d比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
　　②Caspase-3：假手术组仅见少量的阳性细胞，脊髓损伤后各组均可见阳性细胞表达，1d、3d、7d，A、B、C、D各组阳性细胞表达明显高于E组（P＜0.05），A、B、C各组阳性细胞表达明显低于D组（P＜0.05）；治疗1d后，A、B、C组阳性细胞表达未见明显差别（P＞0.05）；治疗3d、7d后，A、B两组阳性细胞表达低于C组（P＜0.05），但A、B两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；A、B两组1d与3d、3d与7d组内比较，C、D两组1d与3d、1d与7d、3d与7 d组内比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　1．截瘫三联针在改善脊髓损伤大鼠后肢运动功能方面有效；
　　2．截瘫三联针的作用机制可能与促进神经保护因子CGRP的表达，抑制细胞凋亡因子Caspase-3的表达，从而抑制细胞凋亡，减轻继发性损害，保护神经细胞，促进其再生修复有关；
　　3.“以运动为腧”的取穴方法可作为一种新的取穴方法应用于临床。

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引言

实验研究

1 实验材料

1.1 实验对象

1.2 主要试剂和药品

1.3主要设备和仪器

2实验方法

2.1 动物模型的建立

2.2 动物分组和治疗方法

3 观察指标及测定方法

3.1 一般情况观察：

3.2 动物行为学观察：

3.3 组织形态学观察

3.4苏木素-伊红（ Hematoxylin-eosin，HE）染色：

3.5 免疫组织化学方法：

4 图像分析及数据统计学处理

5 结果

5.1 实验大鼠一般情况

5.2 行为学观察结果

5.3 HE染色结果

5.4 免疫组化结果

6 讨论

6.1 现代医学对 SCI的认识

6.2 祖国医学对 SCI的认识

6.3 脊髓损伤模型的选择依据

6.4 治疗方案的选择依据

6.5 评价指标的选择依据

6.6 结果分析

7 结论

问题与展望

致谢

参考文献

附件1：文献综述:急性脊髓损伤治疗及作用机制概要

附件2：BBB评分表

附件3：图片

附件4：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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