加味人参乌梅汤对腹泻模型大鼠肠道菌群构成特征的影响研究

摘要

目的：采用多聚酶链反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分子生态学技术研究加味人参乌梅汤对腹泻模型大鼠肠道菌群构成特征的影响，进一步探讨加味人参乌梅汤治疗小儿腹泻的作用机制。为揭示中医药多层次、多靶点的复杂作用体系，促进临床疗效的提高提供理论参考和实验依据。
　　方法：48只SD大鼠，随机抽取12只作为空白组，其余大鼠参照文献采用复合因素造模法制作腹泻模型。造模成功后，将模型大鼠随机分为模型组、西药组、中药组。在造模完成后进行药物干预，中药组给予加味人参乌梅汤，西药组给予妈咪爱，空白组与模型组予以生理盐水灌胃。（1）定时测取各组大鼠的体重、腹泻数、腹泻率等指标。药物干预完成后，取各组大鼠结肠组织，制作病理切片，光镜下观察各组大鼠结肠组织病理改变情况。并通过数据分析观察加味人参乌梅汤对腹泻大鼠的治疗效应。（2）药物干预完成后，取大鼠结肠内容物，采用Stool DNA Kit试剂盒按改进的快速离心法提取大鼠肠道内容物基因组总DNA，采用巢式PCR对粪便内的16SrDNA基因V3可变区片段进行扩增。将扩增产物进行变性梯度凝胶电泳（DGGE），剪取凝胶上特征条带，以条带中的DNA为模板进行扩增，将所得扩增产物测序，并与细菌图谱数据库进行对比以鉴定菌群种属。
　　结果：（1）与模型组相比较，中药组大鼠的腹泻明显减轻（p＜0.01），体重明显增长（p＜0.01），更接近于空白组；与模型组相比较，中药组大鼠的结肠黏膜病理学评分具有显著差异（p＜0.05）；与西药组相比较，中药组结肠黏膜病理学评分无差异（P＞0.05）。（2）中药组与西药组经药物处理后腹泻模型大鼠肠道微生物相对丰度最高的为厚壁菌门类细菌，其次为拟杆菌门和变形菌门类细菌。加味人参乌梅汤治疗后大鼠肠道厚壁菌门类细菌含量显著增加（p＜0.01），而肠道拟杆菌门类细菌含量显著降低（p＜0.01），肠道变形菌门类细菌含量无显著变化（p＞0.05）。与空白组相比，经加味人参乌梅汤治疗后大鼠菌群较之西药组更接近空白组。
　　结论：（1）加味人参乌梅汤对腹泻模型大鼠具有良好的治疗作用；（2）加味人参乌梅汤能够有效改善肠道微生态环境。与西药相比较，加味人参乌梅汤对肠道菌群平衡更具有良性的调控作用。该方药可能通过影响肠道菌群结构，纠正菌群紊乱，进而发挥止泻效应。

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引言

第一部分 文献研究

1.人体正常肠道菌群的构成

2.肠道菌群的分类

3.儿童肠道菌群的建立及影响因素

4.肠道菌群对儿童生理作用

5.肠道菌群与疾病

6.肠道菌群与腹泻病

7.肠道菌群研究的工具和方法

第二部分 实验研究

一、加味人参乌梅汤对腹泻模型大鼠的治疗效应研究

二、加味人参乌梅汤对腹泻大鼠肠道菌群构成特征的影响研究

第三部分 讨论

一、加味人参乌梅汤立法组方依据

二、腹泻病证模型的研究

三、阳性对照药物的选择

四、加味人参乌梅汤对腹泻模型大鼠肠道菌群构成特征的影响

结论

不足与展望

参考文献

文献综述: 小儿腹泻中西医研究进展

致谢

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