人血液非对称性二甲基精氨酸检测方法及冠心病多参数辅助诊断模型的建立

摘要

背景和目的:
　　目前冠状动脉造影技术作为冠心病(Coronary heart disease,CHD)诊断金标准,属于有创性诊断技术,不良反应较多;64层螺旋CT和双源CT用于无创评价冠心病患者冠脉的病变情况,但价格昂贵,难以全面推广和普及。有临床流行病学调查表明血液非对称性二甲基精氨酸分子(Asymmetric dimethylarginine,ADMA)含量增高可能为心血管疾病的危险因素,并且与冠心病危险程度相关。目前ADMA分子的检测方法不能满足临床检测要求,限制了该分子的临床应用。我们研究团队正在建立可用于临床检测该分子的酶联免疫分析方法,本研究则建立测定ADMA分子的高效液相色谱方法,以期为酶联免疫分析法检测ADMA分子的试剂盒做评价,同时也可以为临床检测、研究该分子做准备。同时,我们在35项血液生化指标中寻找CHD组与非冠心病(Non-coronary heart disease,NCHD)组间的差异指标,建立诊断模型,以期用于行冠状动脉造影检查之前的初筛,降低冠状动脉没有实质性病变的人群行冠状动脉造影的风险。
　　对象与方法:
　　根据拟定的纳入和排除标准,选取研究对象398例,入选病例行冠状动脉造影检查分为CHD组(114例)和NCHD组(284例)并记录Gensini积分,冠心病组根据冠状动脉的病变支数分为单支病变组(Single-vessel CHD)、双支病变组(Double-vessel CHD)和三支病变组(Three-vessel CHD),其中双支病变组和三支病变组统称为多支病变组(Multi-vessel CHD)。
　　血清ADMA、对称性二甲基精氨酸分子(Symmetric dimethylarginine,SDMA)采用高效液相色谱法检测;35项生化指标采用罗氏公司COBAS 8000全自动生化分析检测。
　　使用SPSS 19.0软件用于数据分析。正态定量数据两组间比较用T检验,多组间比较采用方差分析;非正态或方差不齐的资料两组间比较采用非参数U检验,多组间比较采用非参数H检验,组间的两两比较采用推广了的t检验。计数资料分析采用χ2检验。P<0.05有统计学意义。35项指标中筛选出差异指标用于多因素Logistic回归(Multivariate Logistic regression)和逐步判别分析(Stepwise discriminant analysis),建立区分CHD组与NCHD组数学分类模型。
　　结果:
　　一、建立了基于高效液相色谱技术的血清ADMA分子检测方法,可同时检测精氨酸(Arginine,Arg)、高精氨酸(Homoarginine,H-Arg)及SDMA。4种待测标准品标准曲线的决定系数R2>0.999;两个水平的加样回收率范围88.7％~110.2%,且差异无统计学意义;批内、批间变异系数分别低于5%和7%;最低检测限Arg为0.02μmol/L,H-Arg、ADMA及SDMA为0.01μmol/L;最低定量限Arg为0.05μmol/L,H-Arg、ADMA及SDMA为0.03μmol/L。
　　二、ADMA和SDMA与CAG病变支数及Gensini积分的相关性分析。与NCHD组比较,CHD组ADMA与SDMA增高,具有显著的统计学差异。ADMA及SDMA在冠心病单支病变组、多支病变组间差异无统计学意义。ADMA及SDMA与冠脉病变支数及Gensini积分之间存在弱相关,相关性检验有统计学意义。
　　三、常规生化指标在冠心病诊断中的价值评价。与NCHD组比较,ALT、GGT、TNT、UN、Cr、UA、APOA1、P、HDL、LP(a)、Na及NTBNP共12项指标差异具有统计学意义,而且TNT及NTBNP在多支病变组高于单支病变组,差异具有统计学意义。利用SPSS19.0软件对差异指标进行多因素分析,建立CHD组与NCHD组鉴别诊断模型。经二元Logistic回归分析,最终有5个参数(APOA1、P、LP(a)、Cr和GGT)进入方程(Y=logit(P)=3.202-2.892*APOA1-1.603*P+0.012*GGT+0.064*LP(a)+0.021*Cr),保存预测概率P,做ROC(Receiver operating characteristic,ROC)曲线分析,5个参数联合检测鉴别CHD组和NCHD组的曲线下面积(Area under curve,AUC)为0.766,敏感性为83.4%,特异性为57.0%;判别分析的入选参数同Logistic回归分析一致,建立判别方程P=eb/(eb+ec)b=35.230*APOA1+25.825*P+0.000*GGT+0.052*LP(a)+0.413*Cr-51.825c=38.260*APOA1+27.605*P-0.010*GGT+0.009*LP(a)+0.392*Cr-59.865保存预测概率P,做ROC曲线分析,AUC为0.762,敏感性为76.0%,特异性为66.7%。两种多参数分析方法经z-score检验,AUC无统计学差异。利用判别方程对398例研究对象重新诊断分组,总准确度为67.9%,敏感性为66.5%,特异性为69.3%。
　　结论:
　　建立了基于高效液相色谱技术的血清ADMA分子检测方法,可同时检测精氨酸(Arginine,Arg)、高精氨酸(Homoarginine,H-Arg)及SDMA分子。经过系统的方法学评价表明,结果准确,可用作比较ADMA分子检测方法的参考,也可用于临床检测、研究该分子。CHD组血清ADMA、SDMA水平显著高于NCHD组,且与冠状动脉的病变程度、Gensini积分有一定的相关性,相关性检验有统计学意义。血液ADMA、SDMA分子浓度增高可能为冠心病的危险因素。建立了鉴别诊断冠心病的外周血多参数Logistic回归分析模型和判别分析模型,有望用于冠脉造影前的初筛检查。

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前言

正文

第一章 高效液相色谱法检测人血液中非对称性二甲基精氨酸浓度

1 材 料

2 方 法

3 结 果

4 讨 论

5 小 结

第二章 非对称性二甲基精氨酸浓度与冠状动脉粥样硬化程度的相关性

1. 材 料

2. 方 法

3. 结 果

4. 讨 论

5. 小 结

第三章 血清常规生化指标与冠心病相关性分析

1. 材 料

2. 方 法

3. 结 果

4. 讨 论

5. 小 结

全文结论

参考文献

文献综述

攻读学位期间发表论文及会议交流情况

致谢