肿瘤浸润淋巴细胞与NSCLC复发转移的关系研究

摘要

【目的】肿瘤浸润淋巴细胞的存在已成为宿主抗肿瘤免疫的重要组织学证据。我们对其进行系统回顾和META分析,以探讨肿瘤浸润淋巴细胞在非小细胞肺癌中的预后价值。结合META分析结果及文献提示,检测NSCLC肿瘤微环境T淋巴细胞亚群和肿瘤相关细胞因子的表达水平、分布与功能状态,并探索其与早期肺癌复发转移中的关系,以期从免疫角度筛选出早期非小细胞肺癌患者术后复发转移的高危人群,进行及早干预。
　　【方法】第一部分:按检索策略对MEDLINE/Pubmed,ElsevierScienceDirectandCochraneLibrarydatabases等英文数据库以及国内的中国生物医学文献统计库(CBM)、中国期刊全文数据库(CNKI)、中文科技期刊数据库(VIP)等数据库进行检索,并检索所获得文献的参考文献、综述及重要会议资料,纳入CD3、CD4、CD8和FoxP3在非小细胞肺癌中的预后价值的研究(最后检索日期为2012年12月30日)。以ReviewManager5.0进行META分析。第二部分:查找1998-2007年间在我院行手术治疗的NSCLC患者,挑选病理及随访资料完整的107例患者,收集其病理标本,利用免疫组化染色,研究癌内及癌旁微环境CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞、CD28+细胞、Foxp3+细胞、CTLA-4+细胞及细胞因子Cox-2、TGF-β1、IL-2、IL-10、IL-12R、HIF-1a的分布、数目与肺癌复发转移的关系。第三部分:挑选第二部分中Ⅰ-Ⅱ期的手术患者,利用免疫组化的方法研究癌内及癌旁微环境中免疫细胞及细胞因子的分布、数目与早期NSCLC术后复发转移的关系,寻找高危人群的筛选指标。
　　【结果】对1197例NSCLC患者数据的Meta分析结果显示CD3+和CD8+细胞的高表达与良好预后有关,与OS的分析表明CD3+的OR值0.53,95％CI(0.42-0.66),P<0.001,CD8+的OR值0.52,95%CI(0.35-0.77),P=0.001。与DFS的分析表明CD8+细胞的OR值0.68,95%CI(0.51-0.91),P=0.01,表明其高表达与DFS的延长有关。而FoxP3+与OS和DFS均有明显关联,在OS的分析中OR值1.32,95%CI(1.01-1.72),P=0.04。在DFS的分析中OR值1.77,95%CI(1.36-2.29),P<0.01。表明FoxP3高表达不利于OS和DFS的延长。虽然HR值有统计学意义,但生存期延长的绝对值差别不大。
　　对107例手术治疗的NSCLC患者的免疫组化分析结果显示,除传统的TNM分期外,淋巴细胞表达的FoxP3水平(HR=1.336,P=0.031)及肿瘤细胞中表达的IL-2(HR=0.595,P=0.007)、HIF-1a水平(HR=1.510,P=0.002)与DFS明显相关。与OS相关的因素包括淋巴细胞表达的FoxP3水平(HR=1.566,P=0.002)。将全部患者按照免疫效应因素和免疫抑制因素的表达高低分IL-2高表达、免疫抑制因子低表达组和IL-2低表达、免疫抑制因子高表达组。结果提示:IL-2低表达、免疫效应因子高表达组无论在DFS还是OS的分析中均呈现出明显的生存劣势;而IL-2高表达、免疫效应因子低表达组在生存则有明显的优势。
　　对I-II期手术患者微环境中的肿瘤浸润淋巴细胞及细胞因子免疫组化染色结果的多因素生存分析显示,仅肿瘤细胞的HIF-1a表达水平与DFS明显相关(HR=1.416,P=0.026)。而与OS相关的因素包括淋巴结转移(HR=1.769,P=0.042),及淋巴细胞表达的Foxp3水平(HR=1.566,P=0.011)。ROC曲线发现,HIF-1a的曲线下AUC值最大,且P值有意义,其余临床特征及Foxp3等指标在预测早期NSCLC术后复发中均未表现出统计学意义。【结论】CD3、CD8及Foxp3+Treg在微环境中的表达水平是NSCLC预后的相关因素。CD3、CD8与OS的延长相关,FoxP3与DFS的延长相关。CD4与生存及复发的关系还有待进一步确认。通过检测非小细胞肺癌组织中CD3、IL-2及Foxp3的表达水平,评估局部免疫状况,有望能够鉴别高风险患者,进而使这些患者从辅助治疗中获益。
　　免疫组化的阳性计数方法需要进一步规范,取得共识并形成指南,以取得一致性更高的结果,使其临床应用成为可能。在我们的计算中,除传统的TNM分期、病理类型与复发转移有明显相关外,NSCLC患者免疫微环境中FoxP3+Treg细胞及IL-2、HIF-1a等细胞因子都通过不同的途径参与了复杂的免疫抑制和免疫逃逸机制。应用免疫效应因子IL-2和FoxP3+Treg、HIF-1a等免疫抑制因子的表达水平联合分析,可将患者明确分为复发转移高危组和低危组,对预后有明确的提示作用。
　　早期NSCLC术后患者肿瘤局部微环境中即处于复杂的免疫失衡状态,免疫抑制力量占主导地位。FoxP3+Treg、HIF-1a等免疫抑制因子的表达与预后有明显的关联。HIF-1a作为高危指标,对复发转移的提示作用甚至优于传统的TNM分期及分化程度等。利用该指标对高危患者进行筛选,可为术后免疫治疗或化疗的适时介入、治疗强度的选择等临床决策提供依据。可望通过此类甄别手段及个体化治疗策略,不仅降低高危患者的复发转移率,更减少过度治疗,改善患者生活质量。

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缩略词表（Abbreviation）

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英文摘要

前 言

第一部分 肿瘤浸润淋巴细胞与NSCLC预后关系的META分析

材料和方法

1. 资料来源

2. 文献入排标准

3. 文献资料提取和质量评估

4. 统计分析方法

结 果

1．文献检索结果及研究特点

2．统计分析结果

3．敏感性分析

4．发表偏倚

讨 论

第二部分 肿瘤浸润淋巴细胞及细胞因子与NSCLC复发转移的关系研究

材料和方法

1.材料

2. 方法

结 果

1．入选患者临床病理特征

2．免疫组化染色结果

3．统计分析

讨 论

第三部分 肿瘤浸润淋巴细胞及细胞因子与早期NSCLC复发转移的关系研究

材料和方法

结 果

1．入选患者临床病理特征

2．免疫组化染色结果

3．统计分析

讨 论

结 论

参考文献

攻读学位期间发表文章

综述

致谢