摘要
Abstract
一、文献综述
1.1人粒巨噬细胞集落刺激因子研究进展
1.1.1 hGM-CSF的结构特点及生物学活性
1.1.2 hGM-CSF的表达调控
1.2蓝藻基因工程
1.2.1蓝藻基因组的研究
1.2.2蓝藻基因工程载体
1.2.3蓝藻基因转移系统的选择
1.2.4蓝藻表达外源基因的进展
1.3本实验的研究内容、目的与意义
1.3.1本研究的内容
1.3.2本研究的目的与意义
二、材料与方法
2.1实验材料
2.1.1质粒、菌株和蓝藻株
2.1.2 工具酶和试剂
2.1.3主要仪器
2.2实验方法
2.2.1培养基的配制
2.2.2蓝藻的培养、纯化及保存
2.2.3穿梭表达载体的构建
2.2.4蓝藻的转化与筛选
2.2.5转基因藻的DNA检测
2.2.6转基因藻的Western Blot分析
2.2.7转基因藻生理活性的检测
2.2.8转基因藻培养条件的优化
三、结果与分析
3.1 hGM-CSF基因在鱼腥藻7120中的表达
3.1.1穿梭表达载体pDC-GM0的构建
3.1.2 GM0藻株的获得
3.1.3 GM0藻株的检测
3.1.4 GM0藻株的培养及生理活性的检测
3.1.5环境因子对GM0藻株生长的影响
3.2 hGM-CSF的基因修饰及其在鱼腥藻7120中的表达
3.2.1穿梭表达载体pDC-GM1的构建
3.2.2 GM1藻株的获得
3.2.3 GM1藻株的分子检测
3.2.4 GM1藻株的培养、生理活性的检测与比较
3.2.5环境因子对GM1藻株生长的影响
四、讨论
4.1利用蓝藻作为宿主表达hGM-CSF的可行性
4.1.1利用基因工程手段制备hGM-CSF的必要性
4.1.2在鱼腥藻7120中表达hGM-CSF的优势
4.1.3在鱼腥藻7120中成功表达hGM-CSF
4.2基因修饰是提高外源基因在蓝藻细胞中表达的有效途径
4.2.1 SD序列对外源基因表达效率的影响
4.2.2遗传密码子的偏好性对外源基因表达效率的影响
4.3基因修饰对转基因藻生长及光合活性的影响
4.4通过优化培养条件提高转基因藻的生长
4.4.1不同温度条件对转基因藻生长的影响
4.4.2不同pH对转基因藻生长的影响
五、结论与展望
5.1结论
5.2展望
六、参考文献
hGM-CSF基因PCR产物测序结果
基因修饰后的hGM-CSF基因PCR产物测序结果
符号与缩写表
在学期间撰写与发表的学术论文和会议摘要
致谢
论文独创性声明和论文使用授权声明
答辩委员会
