胶体金免疫层析方法对NSE和CEA进行联合定量检测

摘要

纳米技术是研究尺寸在1～100 nm间物质组成体系的运动规律,相互作用及其在应用中实现其特有功能和智能作用的科学技术。胶体金免疫层析方法是一种将胶体金标记、免疫检测和层析分析技术等多种方法有机结合在一起的固相标记免疫检测技术,具有灵敏、便捷、安全、低成本等特点。肺癌的早期诊断和早期治疗是提高肺癌患者生存率和降低死亡率的必要手段。肿瘤标志物的发现为肿瘤的早期诊断提供了可能。检测肿瘤标志物已经成为了肿瘤筛查和早期诊断的重要方法。但是迄今为止尚未发现对各型肺癌均具有高度敏感性和特异性的标志物,所以目前多采用多种肿瘤标志物联合检测的方法进行检测。而且肿瘤标志物的检测现在正朝着定量化的方向发展。本文主要利用了胶体金免疫层析技术对神经元特异性烯醇化酶(NSE)和癌胚抗原(CEA)进行了联合、定量检测。
　　 (1)采用胶体金免疫层析技术制备NSE定量检测卡。实验中对胶体金制备的条件、胶体金探针制备的条件、免疫胶体金稀释液配方和T／C线上抗体的浓度进行了摸索,对NSE的标准溶液进行了定量检测。结果显示,该检测卡具有较高的灵敏度,最低检测浓度为5ng／mL。在很宽的范围内具有很好的线性关系,R2=0.9817,且重复性良好。
　　 (2)采用胶体金免疫层析技术制备NSE／CEA联合、定量检测卡。定性分析实验中,发现NSE和CEA抗原之间没有交叉反应,互不干扰,表明具有较强的特异性。在定量检测实验中,NSE和CEA的检测灵敏度分别达到了5ng／mL和3ng／mL,且均具有良好的线性关系,R2NSE=09819,R2CEA=0.9831,重复性良好,有较好的实验价值和医学应用价值。

目录

文摘

英文文摘

第一章 文献综述

1.1 研究意义

1.2 研究进展

1.3 胶体金免疫层析方法

1.3.1 免疫金的制备

1.3.2 硝酸纤维素膜的选择

1.3.3 胶体金免疫层析的双抗夹心法和竞争法

1.3.4 胶体金免疫层析方法发展趋势

1.4 本论文研究的目的与内容

第二章 基于胶体金免疫层析方法的神经元特异性烯醇化酶(NSE)定量检测

2.1 引言

2.2 实验部分

2.2.1 仪器与试剂

2.2.2 胶体金的制备

2.2.3 胶体金的紫外扫描,Zata电位、粒径测定和电镜扫描

2.2.4 胶体金标记抗体条件的确定

2.2.5 胶体金的标记

2.2.6 胶体金免疫层析检测卡的结构

2.2.7 检测卡的制备

2.2.8 检测步骤、原理和结果判定

2.2.9 对NSE标准溶液进行定性和定量检测

2.2.10检测卡的特异性实验

2.2.11检测卡稳定性实验

2.3 实验结果

2.3.1 胶体金的紫外扫描,Zata电位、粒径测定和电镜扫描

2.3.2 胶体金标记条件的确定

2.3.3 检测卡对NSE标准溶液的定性和定量检测

2.3.4 检测卡对NSE的特异性试验

2.3.5 该检测卡的稳定性试验

2.4 讨论

2.5 结论

第三章 胶体金免疫层析方法对NSE和CEA(癌胚抗原)的联合定量检测

3.1 前言

3.2 实验部分

3.2.1 实验所需试剂与耗材

3.2.2 实验所用仪器

3.2.3 胶体金的制备

3.2.4 胶体金的紫外扫描,Zata电位、粒径测定和扫描电子显微镜扫描

3.2.5 胶体金标记抗体条件的确定

3.2.6 免疫胶体金的制备

3.2.7 胶体金免疫层析检测卡的结构

3.2.8 检测卡的制备

3.2.9 检测步骤、原理和结果判定

3.2.10对NSE、CEA进行交叉实验

3.2.11胶体金检测卡对NSE、CEA混合溶液进行联合检测

3.2.12试纸条的特异性试验

3.3 实验结果

3.3.1 用Zetasizer对制得的胶体金进行Zeta电位、粒径测定

3.3.2 胶体金标记条件的确定

3.3.3 标记前和标记后的胶体金粒径分布

3.3.4 对NSE、CEA进行交叉实验

3.3.5 对NSE、CEA混合溶液进行联合检测

3.3.6 对NSE、CEA混合溶液进行定量检测

3.3.7 试纸条的特异性试验

3.4 讨论

3.5 结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间的研究成果

答辩委员会审查意见表