茶多酚磷脂复合物的制备和抗氧化性能检测方法的探究

摘要

茶叶提取物主要含有活性成分茶多酚,具有独特的抗氧化和抗脂质过氧化性能,但由于茶多酚具多酚羟基,是极性较大的物质,易溶于水,难溶于油中,而限制了其在油脂类产品中的应用和发挥更好的人体生理活性作用。另外,由于茶多酚有很强的苦涩味,而且在使用过程中稳定性较差,特别是在碱性环境中,极易被氧化,而失去其特有的抗氧化作用,更限制了其在食品中的广泛使用。再者,由于茶多酚类分子因其水溶性较强,在生物体内难以吸收利用,而大大降低了其特有生物活性的生物利用度。磷脂是动植物细胞中细胞膜、核膜和类脂膜的基本成份,也是神经细胞的组成成份之一,有保护、营养神经细胞,加快其兴奋传递作用,并可修复受损脑细胞与神经鞘细胞。将天然活性成份与磷脂在一定条件下进行复合,得到天然活性成份磷脂复合物,可有效地提高天然活性成份的体内吸收,显著地改善其生物利用度。通过茶叶提取物的磷脂包埋,以改变茶叶提取物的理化性质并保持或增强其在不同环境中抗氧化性能,以扩大茶叶提取物的应用途径,增强在某些环境中的作用。本实验的目的其一在于建立比较稳定的乳化系统化学发光法测定脂质过氧化方法,其二在于考察几种抗氧化剂抗脂质过氧化性能。分别吸取pH9.2的碳酸缓冲液750μl和6mmol的大豆卵磷脂乙醇溶液70μl至测定管中,旋涡振荡器振荡1min后,再分别加入待测样品油溶液30μl和10-3mol鲁米诺溶液100μl至同一测定管中,涡旋振荡1min,置发光仪中35℃保温5min,测定本底值后,再加入5%AAPH水溶液50μl,涡旋振荡1min,置发光仪中35℃保温1min后,连续测10次,每次测定时间6sec,间隔100sec,计算10次积分值。该方法所用仪器简单、操作方便、灵敏、数据稳定(包括重现性和线性)。该方法是测定脂质过氧化过程中的自由基含量,能较直接的反应脂质过氧化程度或样品对脂质过氧化过程中对自由基的抑制能力。氧自由基清除能力或抗氧化能力指数测定方法(Oxygen Radical Absorbance Capacity,ORAC)也是现在热门的抗氧化性能测定方法,通过对已有方法原理的研究,通过对已有ORAC方法原理的研究,设计出了简便操作的常量荧光检测仪,初步确定了该方法的试剂及操作步骤：分别吸取pH6.8的磷酸缓冲液900μl、FL荧光剂200μl、样品200μl ,混合后再加入AAPH溶液700μl ,再次混合后加1300μl至测定管中, 37℃置荧光检测仪中连续测30次,每次测定时间16sec,间隔104sec,计算30次积分值。实验方法的建立为研究抗氧化剂的抗氧化性能提供了新的研究方向。

目录

摘要

ABSTRACT

第一章 引言

1.1 茶多酚概述

1.2 茶多酚的结构组成

1.2.1 花黄素类

1.2.2 花色素类

1.2.3 儿茶素类

1.2.4 缩酸及缩酚酸类

1.3 茶多酚的理化性质

1.3.1 物理特性

1.3.2 溶解性

1.3.3 化学特性

1.3.4 异构性

1.3.5 光谱特性

1.4 茶多酚的主要生理活性和药效作用

1.4.1 茶多酚的抗氧化作用

1.4.2 茶多酚的抗肿瘤作用

1.4.3 茶多酚的抗辐射作用

1.4.4 茶多酚对肾疾患的作用

1.5 本课题完成的工作及意义

参考文献

第二章 茶多酚磷脂复合物的制备

2.1 实验目的

2.1.1 增加茶多酚的脂溶性

2.1.2 增加茶多酚的稳定性

2.1.3 增加茶多酚在生物体内的利用

2.2 实验方法

2.2.1 实验条件选择

2.2.2 使用材料及仪器

2.2.3 茶多酚磷脂包埋

2.3 制备的茶多酚磷脂包埋物TE-ph 检测

2.3.1 紫外光谱检测

2.3.2 HPLC 法测定表观油水分配系数K 值

2.3.3 对二苯代苦味肼自由基(DPPH)的抑制率的测定

2.3.4 油脂脂质过氧化值POV 测定

2.4 小结与讨论

参考文献

第三章 脂质过氧化测定研究

3.1 概述

3.2 油脂的自动氧化

3.2.1 油脂的氧化机理

3.2.2 影响油脂氧化的因素

3.3 化学发光法测定脂质过氧化探索

3.3.1 测定原理与方法

3.3.2 测定条件的选择

3.3.3 实验试剂与仪器

3.3.4 线性关系分析

3.3.5 批内、批间发光积分值稳定性实验

3.4 小结与讨论

参考文献

第四章 几种抗氧化剂抗脂质过氧化性能

4.1 几种常见的脂质过氧化抑制剂

4.2 POV 法对不同抗氧化剂抗氧化性能考察

4.2.1 迷迭香POV 法抗氧化性能考察

4.2.2 TBHQ POV 法抗氧化性能考察

4.2.3 Vc 棕榈酯POV 法抗氧化性能考察

4.2.4 氧酰化LTP POV 法抗氧化性能考察

4.3 化学发光法对不同抗氧化剂抗氧化性能考察

4.3.1 迷迭香化学发光法抗氧化性能考察

4.3.2 TBHQ 化学发光法抗氧化性能考察

4.3.3 Vc 棕榈酯化学发光法抗氧化性能考察

4.3.4 氧酰化LTP 化学发光法抗氧化性能考察

4.4 考察结果分析

4.4.1 POV 法考察

4.4.2 化学发光法考察

4.5 几种抗氧化剂抗脂质过氧化性能比较

4.5.1 常温下脂质过氧化性能比较

4.5.2 98℃加热4h 后脂质过氧化性能比较

4.5.3 小结和讨论

参考文献

第五章 ORAC 常量荧光检测仪检测方法

5.1 测定原理

5.2 实验方法及试剂

5.2.1 实验方法

5.2.2 实验试剂

5.3 实验条件

5.3.1 荧光剂稳定性考察

5.3.2 AAPH 测定浓度考察

5.3.3 抗氧化剂空白对照稳定性考察

5.3.4 Trolox 浓度线性考察

5.4 两种样品的ORAC 值测定

5.4.1 T80 的线性考察

5.4.2 T80 的ORAC 评估

5.4.3 T90 的线性考察

5.4.4 T90 的ORAC 评估

5.5 小结与讨论

参考文献

第六章 总结

6.1 主要结论

6.2 研究展望

致谢

攻读硕士学位期间已发表或录用的论文