毛头鬼伞子实体次生代谢产物的分离、纯化、鉴定及活性研究

摘要

对毛头鬼伞子实体用95％的乙醇浸提三次，乙醇提取物依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取分部。对分部提取物进行抗疱疹病毒(HSV-I和HSV-II)、抗甲型流感病毒(济防90-15)和抑制肿瘤细胞(MCF-7)增殖的活性测定，对有活性的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分部和无活性的氯仿分部(其成分与其他活性分部的成分有交叉)进行分离纯化。经过正相硅胶柱层析、反相硅胶柱层析和凝胶柱层析等分离方法，从乙醇提取物得到1个化合物(化合物1)，从石油醚萃取部分分离得到8个化合物(化合物2-9)，从氯仿萃取部分分离得到8个化合物(化合物6，7，10-15)，从乙酸乙酯萃取部分分离得到7个化合物(化合物2，6，10，12，15-17)，从正丁醇萃取部分分离得到6个化合物(化合物6，17-21)。
　　 运用现代光谱(ESI-MS、HRTOFMS、1D NMR、2D NMR)技术鉴定了从毛头鬼伞子实体中分离得到上述21个化合物。其中，16为新化合物，命名为2-Acetyl-3-hydroxy-1-oxy-quinoline-6-carboxylic acidamide;化合物10为γ-lactone、属于天然产物中首次发现。其余分别鉴定为甘露醇(D-mannitol，1)，月桂酸(lauric acid，2)，麦角甾醇(ergosterol，3)，啤酒甾醇(cerevisterol，4)，ergosteryl-3-O-β-D-glucopyranoside(5)，尿嘧啶(uracil，6)，脑苷脂B(cerebroside B，7)，黄嘌呤(xanthine，8)，tuberoside(9)，对羟基苯乙酸甲酯(methyl4-hydroxyphenylacetate，11)，酪醇(tyrosol，12)，对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid，13)，光色素(7，8-dimethylalloxazine，14)，烟酰胺(nicotinamide，15)，甲酰肼(formylhydrazine，17)，癸烷(decane，18)，烟酸(nicotinic acid，19)，腺苷(adenosine，20)，以及尿苷(uridine，21)。
　　 采用抗疱疹病毒(HSV-I和HSV-II)、抗甲型流感病毒(济防90-15)的方法检测了化合物5(ergosteryl-3-O-β-D-glucopyranoside)、7(cerebroside B)、10(γ-lactone)的生物活性。实验结果显示，三个化合物中在最大无毒剂量下均无抗疱疹病毒和甲型流感病毒的活性。采用体外抑制人乳腺癌细胞株(MCF-7)增殖的方法检测化合物3(ergosterol)、4(cerevisterol)、5(ergosteryl-3-O-β-D-glucopyranoside)、9(tuberoside)和10(γ-lactone)的生物活性。结果显示，化合物5和化合物9对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖有不同程度的抑制作用。其中，化合物9的抑制作用较强，其IC50为10.9μg/mL(18.4μM)。化合物5的抑制作用较弱，当样品浓度为10.0μg/mL(17.9μM)时，其抑制率为12.5％。化合物3、4和10没有抑制肿瘤细胞MCF-7增殖的活性。
　　 本研究从毛头鬼伞子实体的醇提物中分离获得的上述21个化合物中，有1个(化合物16)为新化合物，1个(化合物10)属于天然产物中首次报道。在生物活性试验中，化合物9和5有抑制肿瘤细胞MCF-7增殖的活性。研究结果表明毛头鬼伞的醇提物是毛头鬼伞具有抑制肿瘤细胞增殖的一个活性来源，故今后对其进行充分利用是十分必要的。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

1食药用真菌活性代谢物的类型和生物活性

1.1真菌多糖

1.2蛋白

1.3萜类

1.4甾类

1.5生物碱

1.6黄酮类

1.7核苛类化合物

1.8其它

2毛头鬼伞研究现状

2.1降血糖作用

2.2降血脂作用

2.3提高免疫活性作用

2.4抗肿瘤作用

2.5抑菌作用

2.6抗病毒作用

2.7毒性

3论文设计思路

3.1立题依据

3.2主要研究内容

3.3技术路线

3.4论文预期成果

第二章毛头鬼伞次生代谢产物的提取、分部、活性部位寻找和分离

1提取材料与方法

1.1材料

1.2试剂与仪器

1.3提取和分部

1.4活性跟踪

1.5分离

2结果与分析

2.1提取物的抗病毒和抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖的测试

2.2分离纯化结果

3小结

第三章毛头鬼伞子实体次生代谢产物的结构鉴定

1材料与方法

1.1仪器与方法

1.2化合物的理化常数和光谱数据

2结果与分析

2.1化合物1的结构鉴定

2.2化合物2的结构鉴定

2.3化合物3的结构鉴定

2.4化合物4的结构鉴定

2.5化合物5的结构鉴定

2.6化合物6的结构鉴定

2.7化合物7的结构鉴定

2.8化合物8的结构鉴定

2.9化合物9的结构鉴定

2.10化合物10的结构鉴定

2.11化合物11的结构鉴定

2.12化合物12的结构鉴定

2.13化合物13的结构鉴定

2.14化合物14的结构鉴定

2.15化合物15的结构鉴定

2.16化合物16的结构鉴定

2.17化合物17的结构鉴定

2.18化合物18的结构鉴定

2.19化合物19的结构鉴定

2.20化合物20的结构鉴定

2.21化合物21的结构鉴定

3小结与讨论

第四章毛头鬼伞次生代谢产物的生物活性

1材料与方法

1.1抗疱疹病毒实验材料和方法

1.2抗流感甲型病毒实验材料和方法

1.3抑制肿瘤细胞MCF-7增殖实验材料和方法

2结果与分析

2.1化合物抗疱疹病毒和流感甲型病毒的结果分析

2.2化合物抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖的结果分析

3小结

结论

本研究创新之处

参考文献

附图

致谢

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