神经精神狼疮靶抗原alpha-internexin捕获及其自身抗体致病机理

摘要

神经精神性狼疮(neuropsychiatric systemic lupuserythematosus,NPSLE)是系统性红斑狼疮(SLE)常见而且严重的靶器官合并症,其临床表现复杂多样,重症NPSLE可直接危及患者生命或致残,是SLE研究的重点和难点。1999年美国风湿病学院(ACR)公布了NPSLE的19种临床分类遍及了中枢神经、周围神经和自主神经系统,其中,认知障碍包括记忆缺失往往同时伴随于各种NPSLE类型,或者作为NPSLE一个独立的临床表型出现,具有一定的代表性。
　　 作为系统性自身免疫病的原型,SLE的自身抗体作为生物标记和致病因子一直是研究热点之一。在NPSLE中已经提示存在多种神经组织特异性/或非特异性的自身抗体,部分可能通过与神经组织抗原直接作用或间接交叉反应介导了神经系统的免疫损伤。本研究旨在通过蛋白质组学方法捕获NPSLE新的靶抗原,并揭示其自身抗体在NPSLE可能的致病机制。获得结果如下:
　　 1)应用双向电泳蛋白质分离技术结合免疫印迹,和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS),鉴定和确认了一种神经元中间丝蛋白alpha-internexin(INA)为NPSLE新的靶抗原；
　　 2)应用分子克隆获得重组纯化的INA蛋白并制备高效价多抗,以此建立了抗INA抗体检测方法。通过对NPSLE及多个对照组的血清/脑脊液抗INA自身抗体检测的群体验证,证实了在～50％的NPSLE患者血清和脑脊液中存在抗INA自身抗体；且该抗体的滴度与认知功能障碍和病情活动性相关；
　　 3)进一步建立动物模型,C57小鼠主动免疫INA+LPS处理后,出现明显的认知障碍,行为学表现和NPSLE相似,脑组织病理学提示了抗体介导的皮层和海马神经元凋亡；
　　 4)体外实验证实了抗INA抗体在大鼠胚胎原代神经元培养中抑制了神经元突起的生长,并进一步介导了神经元的凋亡。
　　 结论:本研究首次发现并确证了NPSLE患者存在抗中间丝蛋白INA的自身抗体,并通过一系列体内和体外实验首次揭示了该自身抗体介导神经元损伤的机制。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

第一部分 双向电泳结合免疫印迹和质谱分析捕获神经精神狼疮靶抗原α-internexin及其纯化重组蛋白和多抗的制备

引言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 抗internexin自身抗体在神经精神狼疮和对照组血清/脑脊液样本的群体验证

引言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 Internexin主动免疫建立神经精神狼疮样认知障碍动物模型的体内实验

引言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第四部分 抗internexin抗体抑制原代神经元突起生长并导致神经元凋亡的体外实验

引言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

全文讨论和结论

附录 神经精神狼疮和狼疮伴中枢神经系统感染鞘内细胞因子和趋化因子谱

参考文献

致谢

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