原发性甲状旁腺功能亢进症的临床与分子发病机制研究

摘要

目的：随着血钙和血清甲状旁腺激素(PTH)测定的普及以及临床医生对原发性甲状旁腺功能亢进症认识的深入，该病的发病率日益增高。但不清楚近十年来我国原发性甲旁亢的现状如何。甲状旁腺癌虽然少见，但临床表现更重，死亡率很高。甲状旁腺肿瘤的确切发病机制并未明了。因此本研究拟通过分析原发性甲旁亢的临床表现和分子生物学改变，比较良恶性肿瘤间的差异。总结我国原发性甲旁亢的现状，从遗传学和表观遗传学角度探讨甲状旁腺肿瘤特别是甲状旁腺癌可能的发病机制。
　　 方法：分析2000年至2010年间在本科就诊的确诊为原发性甲旁亢患者的临床生化以及病理资料。选取良恶性肿瘤组织标本，用MLPA方法对39个肿瘤候选基因进行基因拷贝数变异分析，探讨基因拷贝数变异在良恶性甲状旁腺肿瘤发生发展中的作用。以甲基化特异性定量PCR方法探讨良恶性甲状旁腺肿瘤中Wnt信号通路相关基因DNA甲基化状态。运用ChIP技术探讨良恶性甲状旁腺肿瘤中Wnt信号通路相关基因组蛋白H3K4以及H3K9甲基化状态。并用realtime PCR以及免疫组化分别验证上述结果对靶基因表达以及蛋白表达的影响。
　　 结果：就诊我科的原发性甲旁亢患者逐年增加，无症状的原发性甲旁亢比例从2000年无此类患者增至2010年的50％。但仍以有症状的原发性甲旁亢为主，占病人总数的66％。起病年龄51.26±15.59岁。病理类型主要为腺瘤，腺癌的比例占5.96％。血清PTH与血钙(r=0.585)，肿瘤大小(r=0.441)呈正相关(P<0.001)，与骨密度以及血红蛋白浓度负相关(r=-0.301至-0.469，P<0.001)，能很好的反映疾病严重程度。86.8％的原发性甲旁亢患者合并维生素D缺乏。原发性甲旁亢术后1月时血清PTH升至最高，约1年回复至正常范围内。原发性甲旁亢患者常伴有甘油三酯升高(1.95±1.75mmol/l)，餐后两小时血糖升高(8.07±2.21 mmol/l)，有47.39％的患者合并有高血压。甲状旁腺腺癌患者较甲状旁腺腺瘤的患者病程更短(中位病程4个月vs13个月，P=0.004)，血钙更高(中位血钙3.28mmol/l vs2.89mmol/l，P<0.001)，血清PTH水平更高(中位血清PTH1643pg/dl vs351.4pg/dl，P<0.001)以及肿瘤体积更大(3.57±1.30cm vs2.50±1.19cm，P=0.037)。良恶性甲状旁腺组织中均存在基因拷贝数变异(5.79个vs7.86个)。CCND1基因拷贝数增加在甲状旁腺癌组织中较甲状旁腺腺瘤组织中多见(71％vs21％)。良恶性甲状旁腺肿瘤组织，Wnt信号通路相关基因DNA甲基化异常很常见。恶性甲状旁腺肿瘤组织SFRP2基因DNA甲基化水平明显高于良性组织(28.16±2.01％vs6.01±3.98％，P=0.038)，SFRP2基因启动子区H3K9二甲基化状态恶性组显著高于良性组(P=0.039)。SFRP2基因DNA甲基化以及组蛋白H3K9甲基化可共同作用，抑制SFRP2基因转录，减少SFRP2基因mRNA表达，激活Wnt信号通路，从而促进恶性甲状旁腺肿瘤的发生发展。
　　 结论：我国原发性甲旁亢患者逐年增加，但仍以有症状的原发性甲旁亢为主。血清PTH能很好的反映疾病的严重程度。对原发性甲旁亢患者进行心血管风险评估十分重要。CCND1基因拷贝数增加是甲状旁腺癌重要遗传学基础之一。甲状旁腺癌患者常伴有SFRP2基因DNA甲基化以及组蛋白H3K9甲基化。