含缬酪肽蛋白(VCP)对脑胶质瘤放疗敏感性的影响

摘要

目的:在儿童肿瘤患者中，中枢神经系统肿瘤是仅次于血液肿瘤最常见的肿瘤。手术切除是脑胶质瘤首选的治疗方法，但因为其浸润性生长的特点，术后复发率高，常规治疗会辅助放疗，以提高患者的生存时间。但是由于高级别脑胶质瘤往往对放疗不敏感，因此提高脑胶质瘤细胞对放疗的敏感性是改善这类患者存活率的一个很有希望的途径。研究发现在不同来源的高级别脑胶质瘤细胞中，细胞的放射敏感性与细胞中辐射激活的DNA-PK活性高度相关，因此通过调节DNA-PK的活性可以达到对肿瘤细胞放射敏感性的调节。
　　方法:蛋白免疫沉淀检测与DNA-PKcs相互作用的蛋白VCP。用慢病毒感染的方法干扰脑胶质瘤细胞中VCP的表达后，用WesternBlot检测DNA-PKcs的蛋白水平，实时定量PCR检测DNA-PKcsmRNA的水平。蛋白免疫沉淀以及用蛋白酶体抑制剂处理来检测DNA-PKcs的泛素化修饰以及其降解途径。并用免疫荧光实验检测γ-H2AX聚集簇的表达以及彗星实验-中性电泳实验检测辐照后DNA损伤修复的情况。克隆形成实验以及裸鼠原位移植瘤实验研究细胞以及肿瘤对辐照的敏感性。
　　结果:蛋白免疫沉淀实验发现DNA-PKcs与VCP蛋白有结合，并且VCP的D1结构域和DNA-PKcs的结合是必要的。降低VCP的蛋白水平后发现DNA-PKcs的蛋白水平升高，而其mRNA水平没有变化，同时DNA-PKcs活性增加，对于辐照引起DNA损伤所诱导的γ-H2AX聚集簇的形成具有抑制的作用，彗星实验OTM值3小时和6小时均低于对照组。蛋白酶体抑制剂能够抑制DNA-PKcs的降解。克隆形成实验显示降低VCP的蛋白水平后细胞辐照后的存活率升高。裸鼠原位脑胶质瘤的移植瘤实验发现VCP低表达肿瘤小鼠的生存期较对照组缩短。
　　结论:DNA-PKcs与VCP有相互作用，VCP通过泛素-蛋白酶体降解途径调控DNA-PKcs的降解，并影响其活性。降低VCP的蛋白水平后引起DNA-PKcs蛋白水平的升高和活性增强，对辐照引起的DNA损伤的修复能力增加，细胞对辐照的敏感性下降。因此VCP可以作为调控DNA-PKcs活性进而调控肿瘤细胞对辐照敏感性的靶点。

目录

声明

摘要

英文缩写

绪论

第一部分 VCP与DNA-PKcs的相互作用

1．1 材料

1．2 方法

1．3 结果

1．4 讨论

第二部分 DNA-PKcs存在泛素化修饰并且通过泛素-蛋白酶体系统进行降解

2．1 材料和方法

2．2 结果

2．3 讨论

第三部分 脑胶质瘤细胞中VCP对IR诱导的DNA损伤修复的影响

3．1 材料及方法

3．2 结果

3．3 讨论

第四部分 VCP对脑胶质瘤细胞以及小鼠原位脑胶质瘤移植瘤放射敏感性的作用

4．1 材料及方法

4．2 结果

4．3 讨论

第五部分 结论

参考文献

附录一

致谢

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