重组人釉原蛋白和猪釉基质蛋白对人成纤维细胞生物学特性作用的比较研究

摘要

目的：比较重组25KDa全长人釉原蛋白（rhAm）和提取的猪釉基质蛋白（EMPs）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）和人包皮成纤维细胞（HFF）生物学特性的影响，初步探讨rhAm促进牙周组织再生的作用和可能机制，探索rhAm临床应用的可行性。
　　意义：采用两种蛋白作为刺激因素，观察成纤维细胞在不同条件下的生物学特性变化，了解rhAm和EMPs对目标细胞影响的差异，以期对细胞工程学和口腔药理学的基础研究提供理论数据。同时对rhAm促进牙周组织再生的机制做初步探讨，为rhAm应用于临床牙周组织再生治疗的可行性提供实验数据。
　　方法：选择BL21/pET28a-His-SUMO-rhAm表达系统，在适宜的条件下经诱导表达和酶切纯化得到25KDa全长rhAm，并采用SDS-PAGE和Western blot鉴定；乙酸法提纯EMPs。体外培养HPDLF和HFF。用不同浓度的rhAm和EMPs分别刺激HPDLF、HFF，观察并比较两种蛋白对细胞粘附、增殖和迁移能力的影响。
　　结果：
　　1、利用His-SUMO融合表达系统，经诱导表达和酶切纯化得到重组25KDa全长人釉原蛋白（rhAm）。通过乙酸法得到猪釉基质蛋白（EMPs）。
　　2、原代培养获得性状稳定的第3-6代人牙周膜成纤维细胞，经鉴定证实为外胚间充质来源的成纤维细胞；培养得到性状稳定的人包皮成纤维细胞株。
　　3、rhAm和EMPs均能明显促进人牙周膜成纤维细胞的黏附、增殖和迁移（p<0.01），两种蛋白之间作用无明显差异(p>0.05)。
　　4、rhAm和EMPs均能明显促进人包皮成纤维细胞株的黏附、增殖和迁移（p<0.01），两种蛋白之间作用无明显差异(p>0.05)。
　　结论：25KDa rhAm和EMPs对成纤维细胞具有相似的生物学作用。rhAm和EMPs可通过增强相关成纤维细胞的生物学活性，从而促进牙周及相关组织的再生和愈合。

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英文缩略语表

前 言

第一部分 重组全长人釉原蛋白（rhAm）的表达纯化及猪釉基质蛋白的提取（EMPs）

1.1材料与方法

1.2 结 果

1.3 讨 论

第二部分 人牙周膜成纤维细胞和人包皮成纤维细胞株的培养及鉴定

2.1 材料与方法

2.2 结 果

2.3 讨 论

第三部分 rhAm和EMPs对HPDLF的影响比较

3.1 材料与方法

3.2 结 果

3.3 讨论

第四部分 rhAm和EMPs对HFF的影响比较

4.1 材料与方法

4.2 结 果

4.3 讨论

全文总结

参考文献

附录:综述

致谢

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