G蛋白偶联受体GPR30介导了雌激素和Tamoxifen诱导的子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭

摘要

他莫昔芬(Tamoxifen)作为一种选择性雌激素受体在临床上调节剂被广泛的应用于激素敏感型乳腺癌患者的抗激素治疗。在乳腺癌患者中,Tamoxifen能显著的降低雌激素敏感乳腺癌的复发和扩散。然而,长期的Tamoxifen治疗会增加患者发生子宫内膜癌的风险。G蛋白偶联受体30(GPR30)是一种雌激素膜受体,已有的研究表明GPR30可以被雌激素和Tamoxifen激活,通过下游MAPK等信号通路的快速激活对基因表达和细胞功能进行调节。本研究的目的是探究GPR30在Tamoxifen导致的子宫内膜癌发生的过程中的作用。研究分以下四个部分进行。
　　第一部分 GPR30对雌激素和Tamoxifen诱导的子宫内膜癌细胞增殖侵袭功能的影响
　　浓度梯度实验发现10-7M E2、10-7M OHT和10-8G1对ISHKAWA和KLE细胞具有较强的增殖促进作用,时间梯度实验发现在6天内三种药物对细胞的增殖促进作用呈现时间依赖趋势;通过于扰质粒稳定转染,ISHIKAWA和KLE细胞中的GPR30被明显下调;GPR30下调后ISHIKAWA和KLE细胞在E2、OHT和G1作用下的增殖、迁移和侵袭能力得到明显抑制;在加用了GPR30的特异性抑制剂G15后,E2、OHT和G1诱导的ISHIKAWA和KLE细胞的增殖和侵袭得到明显抑制。
　　结论:E2、OHT和G1能够促进子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭能力,GPR30的表达下调和激活阻滞制能够抑制E2、OHT和G1诱导的子宫内膜癌细胞增殖和侵袭活性。
　　第二部分GPR30下游通路MAPK通路对雌激素和Tamoxifen作用下子宫内膜癌细胞增殖和侵袭能力的影响
　　E2、OHT和G1在ISHKAWA和KLE细胞中显著上调了MAPK通路蛋白ERK1/2的磷酸化水平;ERK1/2阻滞剂U0126抑制了E2、OHT和G1对ISHIKAWA和KLE细胞的增殖和侵袭能力的促进作用。
　　结论:GPR30下游MAPK通路参与了E2、OHT和G1对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭功能调节。
　　第三部分GPR30对子宫内膜癌相关基因PAX2表达的调节
　　在ISHKAWA和KLE细胞中,E2、OHT和G1上调了PAX2的RNA表达,而加用了U0126、G15后,PAX2的上调被阻滞;GPR30稳定下调后,E2、OHT和G2对PAX2的上调亦被阻滞。
　　结论:E2、OHT和G1在子宫内膜癌细胞中GPR30依赖的促进了PAX2的表达。
　　第四部分 GPR30和PAX2在子宫内膜癌组织中的表达及相关性
　　免疫组织化学检测发现正常子宫内膜(15例)、不典型增生子宫内膜(13例)和子宫内膜癌(37例)之间,GPR30的阳性表达率无明显差异(p=0.125),强阳性表达率具有明显差异(p＜0.001),PAX2的阳性表达率具有明显差异(p＜0.05)。子宫内膜癌中PAX2和GPR30的高表达与肿瘤的分期、分化肌层浸润深度、淋巴结转移等无明显相关性(p＞0.05)。在子宫内膜癌中GPR30的高表达与PAX2的高表达具有明显相关性(p＜0.001)。
　　结论:GPR30和PAX2在子宫内膜癌组织中显著高表达;PAX2与GPR30在子宫内膜癌中的表达呈显著相关性。