内皮细胞来源的微囊泡促进腹膜样组织血管化的研究

摘要

目的：
　　研究脐静脉内皮细胞来源的微囊泡能否促进大鼠来源的腹膜间皮细胞的增殖及使组织工程的腹膜样组织血管化增强的可能性。
　　方法：
　　（1）采用I型胶原酶消化获得人脐静脉内皮细胞，无血清应激刺激脐静脉内皮细胞放微囊泡，同时收集微囊泡并对微囊泡行透射电镜检测和流式细胞术表面marker鉴定。（2）在体外试验中，大鼠来源的腹膜间皮细胞（PMC）与脐静脉内皮细胞来源微囊泡共培养，对PMC及细胞上清培养液液分别行CCK8、RT-PCR和ELISA检测。（3）在体内试验中，腹膜间皮细胞种植在小肠粘膜下层的表面，实验组为加入了微囊泡而对照组未加微囊泡，预培养一周后将复合物移植入裸鼠皮下，2周后取出裸鼠皮下的腹膜样组织行HE染色检测。
　　结果：
　　通过透射电镜可以看到人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡，大小形状不一。流式细胞术检测发现微囊泡表达 CD105、CD29，而 CD45未见表达。同时在加入微囊泡的实验组在体外与对照组相比能明显促进腹膜间皮细胞（PMC）增殖（p<0.05）,加入微囊泡的实验组中VEGF浓度明显高于对照组（p<0.05）。并同时对两组腹膜间皮细胞行VEGF的mRNA表达情况行RT-PCR检测，发现加入微囊泡的实验组比对照组的表达是增高的。对皮下移植2周后取出的复合物染色显示，加微囊泡的实验组比对照组新生的微血管样结构的数量是明显增多的（p<0.05）。
　　结论：
　　我们证实了人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡能够促进大鼠来源的腹膜间皮细胞增殖，刺激腹膜间皮细胞VEGF分泌增多,加速组织工程的腹膜样组织血管化，这一结果为今后微囊泡促进组织工程组织血管化的研究提供了一个很好的理论依据。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

符号说明

前言

第一部分人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡（MVs）的获取及鉴定

一、 绪论

二、材料与方法

1、研究对象

2、主要试剂

3、主要仪器

4、人脐静脉内皮细胞（HUVEC）原代获取

5、细胞爬片的预处理

6、人脐静脉内皮细胞的传代与培养

7、人脐静脉内皮细胞的形态学观察

8、人脐静脉内皮细胞的免疫荧光染色鉴定

9、人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡（MVs）分离和透射电镜扫描鉴定

10、人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡（MVs）的表面marker鉴定

三、结果

1、人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的体外培养与扩增

2、人脐静脉内皮细胞的免疫荧光染色鉴定

3.3、人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡（MVs）的获取及透射电镜检测

3.4、人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡（MVs）的表面marker流式分析鉴定

四、讨 论

五、结论

第二部分人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡促进腹膜样组织血管化的研究

一、绪论

二、材料与方法

1、实验动物

2、主要试剂

3、主要仪器

4、大鼠腹膜间皮细胞（PMC）的体外培养

5、腹膜间皮细胞（PMC）的传代

6、腹膜间皮细胞（PMC）的免疫组织化学检测

7、人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡（MVs）对腹膜间皮细胞增殖的影响

8、人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡对腹膜间皮细胞分泌VEGF的影响

9、PCR检测MVs对腹膜间皮细胞中VEGF的mRNA表达的影响

10、MVs对腹膜间皮细胞构建的SIS支架体内血管化的影响

11、 统计学处理

三、结果

1、腹膜间皮细胞（PMC）的体外培养和扩增

2、腹膜间皮细胞（PMC）的免疫组织化学鉴定

3、人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡（MVs）促进腹膜间皮细胞的增殖

4、人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡（MVs）促进腹膜间皮细胞分泌VEGF

5、人脐静脉内皮细胞来源的微囊泡（MVs）对腹膜间皮细胞VEGF的mRNA表达的影响

6、小肠粘膜下层（SIS）及PMC-SIS复合物扫描电镜观察

7、PMC-SIS复合物移植裸鼠皮下及取出后HE染色观察微血管样结构的数量

四、讨 论

五、结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的论文