P.gingivalis临床菌株多糖免疫原性的初步研究

摘要

目的：在本院实验室建立提取和鉴定牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)临床菌株多糖的方法，进而通过比较各菌株多糖诱导THP-1细胞产生细胞因子的作用，初步分析牙龈卟啉单胞菌临床菌株多糖的免疫原性。
　　材料和方法：采用酚-水提取法粗提牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)标准菌株W83、ATCC33277和各临床菌株SJD2、SJD4、SJD5、SJD11、SJD12多糖成份后，利用核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶及蛋白酶进行纯化，经凝胶电泳结合染色法对所获得的提取物进行鉴定，用鲎试剂终点显色法测定脂多糖活性。将所获得的多糖提取物刺激人单核细胞系THP-1细胞，然后用酶联免疫吸附法检测不同浓度刺激后1 h、4 h、8 h和24 h，细胞上清液中IL-1β、IL-8和TNF-α的浓度；用转染 Toll样受体-2，4（TLR-2,4）报告质粒的HEK细胞检测所获得的多糖提取物信号转导通路。
　　结果：
　　1.通过酚-水提取法提取P. gingivalis临床菌株多糖，经酶处理纯化得到菌株多糖，经鉴定其主要含有脂多糖及荚膜多糖。
　　2.采用鲎试剂法鉴定多糖提取物中脂多糖活性存在菌株间差异。
　　3.各菌株多糖提取物刺激THP-1细胞后，其IL-1β、IL-8和TNF-α分泌具有时间、剂量依赖性，标准菌株组（W83、ATCC33277）分泌量高于临床菌株组(SJD2、SJD4、SJD5、SJD11、SJD12)，后者高于商品脂多糖组（牙龈卟啉单胞菌脂多糖、大肠埃希氏菌脂多糖）。
　　4.刺激环境中的胎牛血清可能影响THP-1细胞细胞因子的分泌量。
　　5.多糖提取物可通过TLR-2信号转导通路发生作用。
　　结论：P. gingivalis多糖粗提物刺激THP-1细胞后，可促使其分泌IL-1β、IL-8和TNF-α，并具有时间、剂量依赖性，且各菌株间分泌量存在一定差异，标准菌株组高于临床菌株组，而后者高于商品脂多糖组。在低浓度胎牛血清培养基环境下，高毒临床菌株多糖提取物刺激后其细胞因子的分泌量明显高于低毒临床菌株多糖提取物。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

英文缩略语表

前言

第一部分P.gingivalis多糖的提取和鉴定

1.1材料与方法

1.1.1 主要试剂及材料

1.1.2 主要仪器

1.1.3 实验方法

1.2 结 果

1.2.1 菌体多糖的纯化及成份分析

1.2.2 LPS活性分析

1.3 讨 论

第二部分 P.gingivalis多糖免疫原性比较

2.1 材料与方法

2.1.1 主要试剂和材料

2.1.2 主要仪器

2.1.3 实验方法

2.2 结 果

2.2.1 THP-1细胞细胞因子的分泌

2.2.2 体外刺激HEK细胞

2.3 讨 论

全文总结

参考文献

附录:综述:牙龈卟啉单胞菌的荚膜及其免疫原性

致谢

在读期间发表文章