肾型IBV S1基因重组BCG菌株的构建及其免疫原性研究

摘要

S1基因是传染性支气管炎病毒(IBV)的主要保护性抗原基因,应用RT-PCR技术特异地扩增嗜肾型传染性支气管炎病毒X株的S1基因,经序列分析证实为S1基因,将其连接到含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的表达载体pRR3上,从而构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pR-α-S1,再电转化至BCG中,形成重组菌株rBCG-S1.热激后S1蛋白在耻垢分枝杆菌 M.smegmatis mc2 155中高效表达,并且通过ELISA 和Western blot检测能够被抗IBV S1蛋白的单克隆抗体识别.将106CFU的重组菌株rBCG-S1皮下注射免疫6周龄的SPF鸡,动物保护试验结果表明重组菌株rBCG-S1对鸡具有一定的免疫保护效果,能够保护SPF鸡抵抗IBV X毒株强毒攻击.血凝抑制试验表明血凝抑制抗体滴度能够显著增加.构建的重组菌株为今后开发新型鸡传染性支气管炎基因工程弱毒疫苗奠定了基础.