核糖核酸酶T2调节精子运动能力的相关研究

摘要

核糖核酸酶T2是广泛表达在原核生物、真核生物上的一类底物非特异性核糖核酸内切酶，它参与细胞核糖核酸分解、细胞免疫应答、细胞增殖与运动等多种功能。此外，它还有肿瘤抑制作用，而这种抑制作用并不是基于它的核糖核酸酶活性，有研究发现核糖核酸酶 T2的家族成员ACTIBIND可以通过与血管生成素竞争性的结合肿瘤细胞中的肌动蛋白，从而抑制细胞的生长与迁移。哺乳动物的精子中表达有丰富的肌动蛋白，并且主要表达在精子头部、颈部和尾部鞭毛部位，其对精子运动能力的产生具有重要的作用。因此我们设想核糖核酸酶T2在哺乳类精子，如小鼠和人精子上是否有表达？如有表达，情况如何？是否通过与肌动蛋白相互作用从而影响精子的运动能力？如果是，那么体外加入纯化的核糖核酸酶T2蛋白是否会影响精子的运动？
　　鉴于上述的推测，我们通过免疫荧光染色法和激光共聚焦显微镜分析检测核糖核酸酶T2在雄性小鼠生殖器官表达、及其在精子上与肌动蛋白的表达关系，结果发现核糖核酸酶T2在雄性小鼠生殖系统主要定位在附睾头部上皮细胞、以及附睾、输精管管腔和前列腺、精囊腺腺腔内，并与肌动蛋白共同表达在雄性小鼠精子的顶体部位、颈部以及尾部鞭毛区域，这说明表达在小鼠精子中的核糖核酸酶T2可能通过与肌动蛋白作用，从而参与精子运动能力的调节作用。因此，根据上述研究结果，我们通过从黑曲霉菌的培养液中分离、纯化出具有生物活性的核糖核酸酶T2，并将核糖核酸酶T2蛋白与小鼠附睾尾部的精子共孵育后，对小鼠精子的运动力及前向运动等指标进行检测，结果证实核糖核酸酶 T2可以明显抑制小鼠精子运动力（p＜0.05）及前向运动（p＜0.05），且抑制效果具有时间及剂量依赖性。最后，我们通过免疫荧光技术对核糖核酸酶 T2在正常生育男性精子上的表达定位以及其与actin表达的共定位进行了鉴定，发现核糖核酸酶T2表达在人精子的顶体部位、颈部以及尾部鞭毛部位，与actin具有部分相似定位，尤其是在与精子运动相关的尾部，并且从黑曲霉菌的培养液中分离、纯化出具有生物活性的核糖核酸酶T2同样可以明显抑制人精子运动力、前向运动力并且抑制效果具有时间依赖性。因此，我们通过明确核糖核酸酶 T2对精子运动力的抑制作用可以为我们进一步研究其作用的分子机制及发现临床因精子运动力低下导致的男性不育的病理机制奠定重要的理论基础并提供必要的实验依据。

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引言

第一章 核糖核酸酶T2蛋白的分离、纯化与鉴定

1.1前言

1.2材料和方法

1.3结果

1.4讨论

第二章 核糖核酸酶T2在雄性小鼠生殖器官、精子的表达及对小鼠精子运动能力影响的研究

2.1前言

2.2材料和方法

2.3结果

2.4讨论

第三章 核糖核酸酶T2对人精子运动影响的研究

3.1前言

3.2材料和方法

3.3结果

3.4讨论

第四章 结论

参考文献

综述： 哺乳动物精子发生中血睾屏障作用的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表或待发表的论文、综述及奖励