化学修饰改造RhD（+）稀有血型

摘要

该实验的目的是选择适合修饰人工红细胞Rh血型的甲氧基聚乙二醇衍生物,将RhD(+)血型改造为RhD(-)血型,为解决临床上RhD(-)血源严重缺乏打下基础.实验比较了四种不同端基的甲氧基聚乙二醇(mPEG)对RhD(+)血型抗原的修饰效果;观察了mPEG修饰对红细胞结构功能及形态的影响;建立了双水相分离系统将修饰与未修饰的红细胞分开并判定修饰的比例;观察了修饰后红细胞4℃下保存期;分析了mPEG与红细胞膜的结合稳定性;并使用mPEG修饰小鼠红细胞,进行小动物输血实验,观察了mPEG修饰对红细胞在受试动物体内寿命的影响.实验结果表明在四种mPEG中,以mPEG-BTC的修饰效果最好,在温和、接近于生理的条件下可以将RhD(+)抗原充分遮蔽,表现出RhD(-)红细胞的性质;mPEG修饰没有影响红细胞的结构功能,包括渗透脆性、自身溶血、乙酰胆碱酯酶活性、膜胆固醇含量、ATP、2,3-DPG、红细胞变形性以及红细胞形态等;mPEG修饰红细胞的比例可达80％以上;修饰后红细胞4℃下可保存21天;保存期内mPEG与红细胞膜稳定结合;小鼠的体内实验证明修饰不会减短红细胞在受试动物体内的寿命.该实验还收集到临床疑难配血病例6例,用谱细胞筛查方法确认它们均含有RhD抗体,病例来自新生儿溶血病产妇及肿瘤和肝硬化患者,这些病例均难以找到合适的供体红细胞.采用mPEG-BTC修饰后的红细胞可与患者血清相配,聚凝胺及抗人球蛋白法检测结果说明修饰后红细胞与疑难血清不出凝集现象,为解决输血中含RhD抗体患者的疑难配血和输血问题打下基础.

目录

缩略词表

摘要

Abstract

前言

第一章四种携带不同端基的甲氧基聚乙二醇对RhD(+)血型抗原修饰效果的比较

1.1实验材料与仪器

1.2实验方法

1.2.1 mPEG修饰红细胞

1.2.2 mPEG修饰对红细胞RhD抗原性的影响

1.2.3血小板聚集仪(platelet aggregometer)检测RhD抗原与D抗体凝集程度

1.3实验结果

1.4讨论

第二章mPEG-BTC修饰对RhD(+)红细胞结构功能的影响

2.1实验材料与仪器

2.2实验方法

2.2.1自身溶血性检测

2.2.2渗透脆性检测

2.2.3乙酰胆碱酯酶活性检测

2.2.4胆固醇含量检测

2.2.5 ATP含量检测

2.2.6 2,3-DPG含量检测

2.2.7变形性检测

2.2.8形态检测

2.3实验结果

2.4讨论

第三章mPEG-BTC修饰RhD(+)红细胞的比例

3.1实验材料与仪器

3.2实验方法

3.3实验结果

3.4讨论

第四章mPEG-BTC修饰RhD(+)红细胞的保存

4.1实验材料与仪器

4.2实验方法

4.2.1渗透脆性检测

4.2.2自身溶血性检测

4.2.3乙酰胆碱酯酶活性检测

4.2.4变形性检测

4.2.5形态检测

4.2.6 ATP含量检测

4.3实验结果

4.4讨论

第五章mPEG-BTC与红细胞膜的结合稳定性

5.1实验材料与方法

5.2实验方法

5.2.1凹形血型鉴定卡检测

5.2.2间接抗人球蛋白法检测

5.2.3双水相系统检测

5.2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测

5.3实验结果

5.4讨论

第六章mPEG-BTC修饰的RhD(+)红细胞在小鼠体内存活

6.1实验材料与仪器

6.2实验方法

6.3实验结果

6.4讨论

第七章mPEG-BTC修饰RhD(+)红细胞在解决疑难输血问题上的初步研究

7.1实验材料与仪器

7.2实验方法

7.2.1抗体筛查

7.2.2 RBC样品制备

7.2.3 mPEG-BTC修饰红细胞

7.2.4聚凝胺法检测

7.2.5间接抗人球蛋白实验

7.3实验结果

7.4讨论

总结

参考文献

致谢

Rh血型系统

附录：已发表的相关论文