低频超声联合微泡提高前列腺癌微环境中抗肿瘤免疫效应的体外实验研究

摘要

目的：本研究揭示血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在前列腺癌微环境中对树突状细胞分化的潜在影响；并通过低频超声联合微泡抑制前列腺癌RM-1细胞中的VEGF表达，探究DCs和脾源性T细胞的表型改变及其与低频超声在前列腺癌微环境中的协同抗肿瘤作用。
　　方法：首先检测小鼠前列腺癌RM-1细胞中VEGF mRNA的表达水平，采用质粒转染的方法下调其表达，并与BALB/c小鼠骨髓源性DCs共培养，通过DCs表型改变判断成熟状态及变化。随后采用正交设计法优化低频超声联合微泡抑制RM-1血管内皮生长因子表达的最佳参数组合，并在细胞膜损伤和蛋白表达水平进行分组验证实验。最后采用尼龙毛柱法获取BALB/c小鼠脾源性T细胞，与低频超声联合微泡辐照后的RM-1和骨髓源性DCs共培养后通过免疫细胞的表型改变判断其分化状态。并从抑制RM-1细胞迁移运动能力、细胞增殖能力和侵袭能力三个方面初步探究体外低频超声联合微泡协同前列腺癌微环境中抗肿瘤免疫的作用。
　　结果：小鼠骨髓源性DCs与RM-1共培养后CD11c和CD83表达阳性率均有所下降；采用下调VEGF表达后的RM-1共培养，可提高CD83(+)DCs比例；根据正交设计实验可知，抑制RM-1中VEGF表达的最优声空化参数组合为：超声频率800kHz，超声功率360mW/cm2，辐照时间30s，微泡/细胞悬液体积比20%。尼龙毛柱法可获得小鼠脾源性T淋巴细胞，与RM-1和DCs共培养后，免疫细胞中CD11c、CD83、CD4、和CD8a的表达水平均有所降低，而共培养前采用低频超声联合微泡辐照RM-1可提高共培养体系中CD11c（+）DCs和CD8a（+）T淋巴细胞的比例；且辐照并与免疫细胞共培养后，RM-1细胞迁移数量最少、增殖和侵袭能力最弱。
　　结论：小鼠前列腺癌微环境中DCs和成熟DCs的分化均受到抑制，而下调VEGF的表达可以促进成熟DCs的分化。低频超声联合微泡可显著抑制小鼠前列腺癌细胞RM-1中VEGF表达，并促进微环境中DCs和T淋巴细胞，尤其是DCs和CD8(+）CTL的分化，从而协同免疫细胞抑制肿瘤的转移、增殖和侵袭能力。

目录

英文缩写索引

前言

一、前列腺癌患者的免疫

二、超声治疗肿瘤的免疫机制

三、超声治疗前列腺癌诱导机体免疫反应

四、展望

参考文献

第一部分小鼠前列腺癌微环境中血管内皮生长因子抑制树突状细胞分化的体外实验研究

1、引言

2、实验材料和方法

3、结果

4、讨论

5、结论

参考文献

第二部分低频超声辐照微泡抑制小鼠前列腺癌细胞RM-1血管内皮生长因子表达的实验研究

1、引言

2.实验材料和方法

3、结果

4、讨 论

5、结论

参考文献

第三部分低频超声联合微泡提高小鼠前列腺癌微环境中抗肿瘤免疫的体外实验研究

1、引言

2、实验材料与方法

3、 结果

4、 讨论

5、 结论

参考文献

全文总结

1、本实验工作总结

2、本实验创新性

3、本文的不足

致谢

攻读硕士学位期间参与的课题项目及奖励

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