A类Ⅰ型清道夫受体在小鼠抗钩端螺旋体感染中的免疫调节作用研究

摘要

钩端螺旋体（简称钩体）是一种带有钩状末端的细长螺旋形细菌，分为致病型钩端螺旋体和腐生型钩端螺旋体，其中致病型钩体感染人或其他易感动物后可导致钩端螺旋体病，至今仍为在全球范围内传播的疾病之一。机体的固有免疫在抵抗钩体感染过程中发挥着重要的作用。A类I型清道夫受体（SR-AI）是一种主要表达在巨噬细胞、树突状细胞上的模式分子识别受体，在机体识别、吞噬和清除病原体方面发挥着重要的固有免疫调节作用，是机体固有免疫的重要组成部分。但当前对SR-AI受体在钩体感染机体过程中发挥何种作用并不清楚。
　　本研究在细胞水平（体外）和动物水平（体内）对钩体的吞噬、炎症调节以及组织病理等方面对SR-AI受体在钩体感染过程中所发挥的功能做了系统的研究。
　　在细胞水平上，利用C57BL/6野生型小鼠腹腔巨噬细胞（PEM-WT）和SR-AI-/-基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞（PEM-SR-AI-/-）、过表达SR-AI受体和对照GFP蛋白的RAW264.7细胞（RAW-SR-AI/RAW-GFP）进行SR-AI受体在吞噬和炎症调节方面的作用研究。研究发现，在相同时间内，PEM-WT细胞比PEM-SR-AI-/-细胞吞噬更多的问号钩体56606v，RAW-SR-AI细胞比RAW-GFP细胞吞噬更多的问号钩体56606v，说明SR-AI受体可以增强巨噬细胞对问号钩体56606v的吞噬能力。同样，在炎症反应方面，56606v刺激后，PEM-WT细胞的TNF、IL-6、IL-10及IL-12?等炎症因子表达比PEM-SR-AI-/-细胞有明显提高，RAW-SR-AI细胞的IL-1α及iNOS炎症因子比RAW-GFP细胞有明显增高，说明SR-AI可增强钩体刺激所引起的细胞炎症反应。为了研究 SR-AI调控炎症反应的机制，质谱分析与SR-AI发生相互作用的分子，发现钩体刺激后SR-AI能够与MVP、HSC-71、ENO1、HSPA9等细胞蛋白相互作用，推测这种相互作用可能在SR-AI调控钩体感染中的作用相关。
　　在动物水平上，通过腹腔注射问号钩体56606v感染野生型C57BL/6小鼠和SR-AI-/-基因敲除型C57BL/6小鼠，发现SR-AI-/-小鼠比WT小鼠有更严重的皮下出血，SR-AI-/-小鼠比WT小鼠的肝部侵染有更多的钩体数量及更强的炎症反应，说明SR-AI受体在钩体感染时能够保护机体、防御机体的感染。
　　此外，通过研究SR-AI受体与肺炎克雷伯菌及铜绿假单胞菌感染的相互作用，发现SR-AI受体能够促进巨噬细胞对肺炎克雷伯菌的吞噬，抑制肺炎克雷伯菌
　　感染过程巨噬细胞IL-1α、IL-6及IL-12?等炎症因子的表达。而对于铜绿假单胞菌，SR-AI敲除后，发现巨噬细胞对菌体的吞噬能力增强，IL-1α、IL-6及IL-12?等炎症因子的表达增加。显示出SR-AI受体与这两种菌的相互作用与 SR-AI与钩体的相互作用存在不同，说明SR-AI受体调控钩体感染与调控这两种菌方式不同。
　　通过以上实验结果表明，SR-AI受体能够增强巨噬细胞对钩体的吞噬，参与并提高巨噬细胞的炎症反应。钩体感染过程中SR-AI受体对炎症反应的调节与其他革兰氏阴性菌存在不同。在钩体感染中SR-AI受体与胞内MVP、HSC-71、ENO1、HSPA9等多种分子发生相互作用，这种相互作用可能和SR-AI受体的调节功能相关。动物实验结果表明，SR-AI受体能够减轻小鼠在钩体感染过程中的皮下出血、减少钩体对肝部的侵染，从而在保护机体防御钩体感染方面起重要作用。

目录

声明

绪论

致病型钩体相关致病因子

机体通过模式识别受体识别钩体并启动免疫反应

A类Ⅰ型清道夫受体（SR-AI）研究现状

钩体与A型I型清道夫受体

第一章 细胞水平研究SR-AI受体与钩端螺旋体的相互作用

引言

第一节 SR-AI受体在小鼠巨噬细胞对钩体吞噬中的作用

第二节 钩体感染时SR-AⅠ受体对小鼠巨噬细胞炎症反应的影响

第二章 动物水平研究SR-AI在机体感染钩体过程中的作用

引言

2.1实验材料

2.2 实验方法

2.3实验结果

2.4讨论

第三章 钩体感染过程中与SR-AI受体互作靶蛋白的初探

引言

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 实验结果

3.4讨论

第四章 SR-AI受体在呼吸道常见致病菌肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌感染中的作用研究----用以和SR-AI受体在钩体感染中的调节作用做比较

引言

4.1实验材料

4.2 实验方法

4.3实验结果

4.4讨论

全文总结

参考文献

致谢

在读硕士期间发表文章