天麻地上茎活性成分提取分离及质量标准研究

摘要

目的：研究天麻地上茎活性成分提取分离纯化技术及生药质量标准，探讨天麻地上茎的开发利用价值，为应用研究奠定基础。 方法：1.实验材料采制：采于陕西勉县中药材新技术开发研究所示范园。收集苗期、花期、果期、成熟期的天麻地上茎，洗净，煮透，低温干燥。另一部分成熟期的天麻地上茎自然干燥。2.活性成分提取分离纯化技术研究：①天麻多糖的提取分离纯化技术研究：以天麻多糖含量为指标，采用正交试验设计研究天麻地上茎天麻多糖的提取工艺；以天麻多糖纯度为考察指标，研究天麻地上茎天麻多糖经过大孔吸附树脂后的纯化程度。用紫外分光光度法结合蒽酮一硫酸法测定天麻多糖的含量。②天麻素的提取分离纯化技术研究：以天麻素含量为考察指标，采用正交试验设计研究天麻地上茎天麻素的提取工艺；以天麻素纯度为考察指标，研究天麻地上茎天麻素经过大孔吸附树脂和硅胶后的纯化程度。用HPLC法测定天麻素的含量。色谱条件：Kromail ODS色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相；乙腈-0.05﹪磷酸溶液(2∶98)，检测波长：220nm。3.通过显微鉴别、理化鉴别、天麻素含量测定、检查等初步确定天麻地上茎的质量标准。 结果：1.活性成分提取分离纯化技术研究：①天麻地上茎天麻多糖的最佳提取工艺为加12倍量水，100Hz超声提取1次，每次40min，提取液浓缩加95﹪乙醇使成60﹪乙醇沉淀。或加10倍量水，中等火力微波提取1次，每次10min，提取液浓缩加95﹪乙醇使成80﹪乙醇沉淀。经大孔吸附树脂(HPD100、DM-18、D-101)纯化后，天麻地上茎天麻多糖的纯度分别为：64.74﹪、 65.24﹪、 60.46﹪，与未经处理的提取液中天麻多糖纯度42.16﹪相比分别提高了22.58﹪、23.08﹪、18.3﹪，其中DM-18树脂纯化效果最好。葡萄糖含量在0.04mg～0.36mg范围内其含量与吸光度呈良好的线性关系，回归方程：A=0.003095×C+0.00125，R=0.9996，平均回收率为98.14﹪，RSD为1.19﹪。②天麻地上茎天麻素的最佳提取工艺为10倍量的70﹪乙醇回流提取3次，每次1h；经大孔吸附树脂(S-8、DM-18、DM-130、DM-7HP)和硅胶纯化后，天麻地上茎天麻素的纯度分别为：12.3649﹪、23.5786﹪、 18.3147﹪、14.6573﹪、14.9955﹪，与未经处理的提取液中天麻素纯度7.3462﹪相比分别提高了1.7倍、3.2倍、2.5倍、2.0倍、2.0倍，其中DM-18树脂纯化效果最好。天麻素在0.098～0.98μg范围内，线性关系良好，线性方程为Y=2942915X+49143.65，r=0.9997，平均回收率为99.70﹪，RSD为0.85﹪。③制定了天麻地上茎的质量标准。 结论：天麻地上茎含有多糖类成分；经大孔吸附树脂和硅胶纯化后，天麻地上茎天麻素和天麻多糖的纯度明显提高。天麻地上茎质量标准草案能作为控制天麻地上茎质量的标准依据。

目录

文摘

英文文摘

陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明

引言

第一部分相关的文献研究

1天麻药材研究概况

1.1天麻(块茎)的研究进展

1.2天麻地上部分(天麻地上茎)的研究进展。

2中药材提取分离纯化研究概况

第二部分实验材料采制

第三部分天麻地上茎天麻多糖的提取分离技术研究

1化学成分预试验

2天麻地上茎中天麻多糖的提取工艺研究

2.1仪器、材料及试剂

2.2实验内容、方法及结果

2.3讨论

3天麻地上茎中天麻多糖的分离纯化技术研究

3.1大孔吸附树脂的预处理

3.2上样液的制备

3.3 过柱

3.4测定含固率

3.5样品测定

3.6讨论

第四部分天麻地上茎天麻素的提取分离纯化技术研究

1天麻地上茎中天麻素的提取工艺研究

1.1材料、仪器与试药

1.2方法与结果

1.3讨论

2天麻地上茎中天麻素的分离纯化技术研究

2.1树脂预处理

2.2样品溶液制备

2.3不同吸附树脂对天麻素的静态吸附量实验

2.4不同吸附树脂对天麻素静态洗脱性能考察实验

2.5洗脱天麻素的乙醇最低体积分数

2.6大孔吸附树脂对天麻素的纯化效果

2.7硅胶对天麻素的纯化

2.8讨论

第五部分天麻地上茎质量标准初步研究

1天麻地上茎质量标准草案

2天麻地上茎质量标准起草说明

结语

参考文献

附录

致谢