市售鸡肉与鸡场中耐药菌污染特征初探

摘要

细菌中抗生素的耐药（Antibiotic resistance，AR）已成为威胁全球公众健康的一大问题，为评价抗生素耐药基因通过市售鸡肉产品和鸡场环境进行迁移的风险，从上海5个大型超市、综合市场、上海市崇明养殖基地、上海市农业科学院庄行试验站采集的10个鸡肉样品、5个内脏样品、6个熟食鸡肉样品和4个饲料、粪便样品中分离对环丙沙星不敏感的细菌（Cipr）、对头孢噻肟不敏感的细菌（Ctxr）、对强力霉素不敏感的细菌（Doxr）、对四环素不敏感的细菌（Tetr）、对红霉素不敏感的细菌（Ermr）和对磺胺甲恶唑/甲氧苄啶不敏感的细菌（Sul/Trir），研究其耐药特征，并用 Southern杂交对耐药基因进行定位，探究耐药菌和耐药基因迁移的风险迁移的风险。
　　结果显示，生鲜鸡肉和内脏中耐药菌普遍存在。15个生鲜样品中，耐药菌分布状况如下：Cipr菌的菌落数为2.80×102~2.20×105 CFU/g；Ctxr菌的菌落数为1.50×102~6.80×105 CFU/g；Doxr菌和Tetr菌的菌落数分别为0.20×102~4.85×105 CFU/g、3.70×102~8.50×106 CFU/g；Ermr菌落数为0.75×102~2.16×107 CFU/g；Sul/Trir菌落数为2.00×102~1.00×107 CFU/g。分离到的3014株多重耐药菌中，96.35％（2096/3014）的菌株至少对两种抗生素不敏感，25.94%（782/3014）的菌株对6种抗生素均不敏感，对环丙沙星、头孢噻肟、强力霉素、红霉素、磺胺和四环素的耐药率分别3.37%、15.75%、11.95%、18.36%、24.79%和25.88%，多重耐药菌已成为普遍现象。烹饪可有效减灭鸡肉和内脏中的耐药菌数量，但从养殖、宰杀、零售到消费者初加工的整个过程中，耐药菌仍有可能通过直接接触等方式进行扩散、威胁人类健康。
　　在鸡肉和鸡场相关样品中分离到的509株菌中筛查9种耐药基因（sul1、sul2、tetA、tetB、tetC、tetE、tetG、tetL和tetM）和I类整合酶基因（intI），检出率分别为5.70%、11.39%、1.38%、4.91%、8.64%、22.59%、36.54%、11.98%和30.84%；至少含有3个耐药基因的菌株共有146株，其中喹诺酮耐药基因qnrs和aac(6’)Ib、β-内酰胺酶类耐药基因blaTEM、blaCTX和blaCMY-2以及甲氧苄啶耐药基因dfrA的检出率分别是1.40%、20.50%、0%、0%、8.90%、12.30%。已鉴定出的耐药基因携带菌株有：葡萄球菌（Staphylococcus sp.34/100）、大肠杆菌（Escherichia coli23/100）、肠球菌（Enterococcussp.13/100）、奇异变形杆菌（Proteus mirabilis9/100）、鞘鞍醇杆菌（Sphingobacteriumsp.9/100）、不动杆菌（Acinetobacter sp.8/100）、嗜冷杆菌（Psychrobacter sp.1/100）、金黄杆菌（Chryseobacterium sp.2/100）、克雷伯氏菌（Klebsiella sp.1/136）。药敏实验结果显示，146株多耐药菌中，92株菌的Tet的最小抑菌浓度（MIC）值大于64μg/ml，123株菌的Sul/Trir的MIC值大于512μg/ml，36株Cipr菌的Cip MIC值大于64μg/ml，5株Ctxr菌的Ctx MIC值大于128μg/ml，9株Doxr菌的Dox的MIC值均大于32μg/ml，4株Ermr菌的Erm的MIC值均大于128μg/ml。表明市售生鲜鸡肉与内脏及鸡场环境中菌群不仅产生较高的多重耐药性，也存在巨大的耐药基因池。
　　Rci1号和 Ct16号菌株的质粒上存在 sul2基因，因此，存在 sul2基因随质粒在不同菌种间迁移扩散的可能性。
　　综上，市售鸡肉及内脏样品与鸡场粪便、饲料样品中耐药菌分布广泛，普遍具有多重耐药性，且含有大量耐药基因，存在耐药基因随质粒在细菌间水平迁移的潜在风险。

目录

声明

第一章 引言

1.1兽用抗生素的使用现状

1.2耐药菌污染现状

1.3 耐药基因污染现状

1.4耐药菌耐药机制

1.5食物链在耐药菌传播过程中的作用

1.5 非致病菌与HGT

1.6 本文创新点

1.7研究技术路线

第二章 耐药菌分布以及多药表型分析

2.1实验材料与设备

2.2试验方法

2.3结果与分析

2.4 本章小结

第三章 耐药基因阳性菌株获得

3.1实验材料与设备

3.2试验方法

3.3 试验结果

第四章 鸡肉及相关样品中耐药基因筛查及菌种测序分析

4.1实验材料与设备

4.2试验方法

4.3试验结果

第五章 耐药基因的定位

5.1实验材料与设备

5.2试验方法

5.3试验结果

5.4 本章小结

总结与展望

参考文献

致谢

研究生期间所获成果